参苓颗粒是由生地黄、酸枣仁、玄参、茯苓等9味中药配伍组成,具有滋阴清热,养血安神功效,在临床上主要用于防治阴血不足所致失眠等症。本课题以中医药理论为指导,应用现代科学方法和手段,在原汤剂的基础上按照中药6.1类新药注册要求进行的剂型改良。对多批次制剂进行了质量分析及指纹图谱和初步药效研究,以确保参苓颗粒制剂的安全有效、稳定可控。1质量分析研究检查研究:照2015年版《中国药典》颗粒剂(四部通则0104)项下对本品的性状、水分、粒度和溶化性等项目进行了检查,均符合相应规定。表明制剂的工艺技术参数科学合理,操作流程切实可行。薄层鉴别研究:确立了本品中包括生地黄及丹参等6味药材的薄层鉴别方法。经多次试验表明,供试品色谱上,在与对照品或对照药材展开相应的位置上,都显现一致颜色的斑点。重现性良好,且阴性对照专属性高。含量测定研究:采用高效液相色谱法对制剂中的两个指标成分毛蕊花糖苷和丹参酮ⅡA进行了含量测定,并同时考察了线性关系、精密度、稳定性、重复性及加样回收率等系统方法学项目。试验表明,开发建立的含量测定方法简易可行,且方法学测试均符合2015年版《中国药典》相关要求,能满足本品的质量分析检测。通过对10批小试样品的测定,本品每袋颗粒(10g/袋)以毛蕊花糖苷计,暂不得低于0.147mg,以丹参酮ⅡA计,暂不得低于0.103mg。浸出物测定研究:照2015年版《中国药典》(四部通则2201)项下的热浸法测定。本品颗粒剂暂定含水溶性与醇溶性浸出物应分别不低于27.1%和3.4%。2指纹图谱研究建立了应用HPLC-DAD梯度洗脱的指纹图谱方法,控制参苓颗粒中各主要成分变化。根据10批次样品的指纹色谱建立了28个共有模式峰,相似度均在0.95以上;并对本品主要化学成分进行了标定,确定指纹图谱中的15号峰为斯皮诺素,16号峰为毛蕊花糖苷,17号峰为(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,21号峰为丹酚酸B,22号峰为哈巴俄苷,28号峰为丹参酮ⅡA;同时对指纹图谱中各色谱峰进行了相关药味的溯源考察,其中7、8、9、10、16号峰源自于生地黄,11、19、20、21、25、26、27、28号峰源自于丹参,3、4、12号峰源自于党参,13号峰源自于茯苓,14、15号峰源自于酸枣仁,17号峰源自于合欢皮,22号峰源自于玄参,23号峰源自于石菖蒲,6号峰可能为生地黄、党参和茯苓药材中共同含有成分,其余1、2、5、18、24号峰可能是各个药材一起煎煮提取工艺制备中的反应产物。此外,浸膏中间体与颗粒制剂之间的关联考察也表现出很高的相似性,表明通过指纹图谱的研究为参苓颗粒剂的工艺制备、质量监测提供了准确可靠的依据。3初步药效学研究本课题采用ip非特异性细胞毒性药物环磷酰胺、糖皮质激素类药物氢化可的松复制大鼠阴血亏虚体征,并辅助水平台环境强制剥夺大鼠正常睡眠,建立起阴血亏虚失眠证候的复合模型。从神经毒性角度探讨经本品颗粒干预后对模型大鼠脑组织中主要调控睡眠平衡的氨基酸Glu、Tau及GABA等神经递质含量的影响。结果表明,参苓颗粒组干预后Glu、Tau和GABA均不同程度下降,Glu/(Tau+GABA)比例降低,尤以中、高剂量组下调更为显著,提示本品颗粒促眠药效作用可能是对复合造模引起的亢进或紧张紊乱状态下的大脑皮质细胞获得调节,降低脑内兴奋性氨基酸毒性作用,从而使兴奋与抑制过程恢复平衡。