紫花苜蓿MsHB7基因的克隆及功能分析

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植物的生长和发育受到各种非生物胁迫因素的影响。干旱和盐胁迫下,植物的生长和生理功能会被影响。转录因子在植物对环境的适应方面起着重要的作用。其中,HD-Zip第I类亚家族主要参与植物对非生物胁迫的响应。本研究旨在从紫花苜蓿中克隆得到HD-Zip第I类亚家族基因MsHB7基因,并将其转入拟南芥和紫花苜蓿中,研究该基因的功能。主要研究结果如下:1.MsHB7基因的克隆与生物信息学分析通过同源克隆,获得了紫花苜蓿MsHB7基因,该基因编码245个氨基酸,并含有两个保守结构域:同源异形域和亮氨酸拉链。系统进化树分析表明MsHB7为HD-Zip I亚类转录因子。2.MsHB7基因的组织特异性表达对紫花苜蓿根、茎、叶和花组织中MsHB7基因的表达水平进行了检测,发现MsHB7基因在不同组织中均有表达,且在花中的表达量最高。3.MsHB7的亚细胞定位通过构建MsHB7基因的亚细胞定位载体,使MsHB7基因与GFP蛋白在烟草细胞中融合表达,结果表明MsHB7蛋白定位在细胞核上。4.MsHB7基因对拟南芥和紫花苜蓿的遗传转化构建植物超表达载体pBI121-MsHB7,分别转化拟南芥和紫花苜蓿,成功获得转基因阳性植株。5.转MsHB7基因拟南芥的耐旱性分析在干旱胁迫下,转基因株系与WT植株相比更为萎蔫,相对含水量更低,转基因株系在干旱胁迫下积累了更多的脯氨酸和丙二醛,这表明转基因株系对干旱更敏感,推测MsHB7基因可能负调控拟南芥对干旱的响应。利用qRT-PCR技术进一步分析了干旱胁迫下ATCAT1、ATDREB2A、ATLEA3、ATRD29A这4个基因的表达水平。结果显示处理之后ATCAT1、ATDREB2A、ATRD29A在转基因中的表达水平明显高于野生型,而ATLEA3的表达水平明显低于野生型,表明MsHB7基因可能调控这些抗逆基因的表达水平,从而调节植物的耐旱性。6.转MsHB7基因拟南芥的耐盐性分析在盐胁迫下,转基因株系同WT植株没有明显差异,推测MsHB7基因不参与拟南芥对盐胁迫的响应。
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