偏头痛是一种常见多发的原发性脑功能性疾病,发病率国外为12.9%~17.6%,国内为0.985%,男女比例1:4。因本病反复发作迁延难愈,给患者造成极大的痛苦,历来被医家视为疑难病症,对本病发病机理及药物治疗成为医界关注的热点之一。现代医学对本病并未形成统一的认识,最早是1863年Wolff提出的血管源学说,1873年Lieving提出神经源学说,20世纪又进一步提出三叉神经-血管反射学说(1990年,Moskowitz提出)、皮层扩布性抑制学说(CSD,1994年,Leac提出)。上述后三种学说着重于解释临床症状。近几年来对偏头痛生化机制和分子遗传学的研究标志着研究深入到了细胞、分子水平。文献报道与偏头痛有关的体液因子有:5-羟色胺(5-HT)、NO、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、降钙素基因相关肽(cGRP)、[Ca2+]i超载等。在偏头痛的发作过程中,始终存在着颅内外血管的舒缩障碍,而引起血管舒缩改变的生化因子近年来也受到重视。然而偏头痛是一种多因素疾病,其发病机制仍尚无定论,因而还没有肯定的根治性治疗,只能预防和控制发作。常用的预防性治疗药物包括钙拮抗剂、三环类抗抑郁药、β-受体阻断剂和抗癫痫药等。上述诸多证据表明偏头痛为一离子通道异常疾病,而钙通道又在其中起着重要的作用,因此阻断钙通道就成为对偏头痛预防性治疗的重要策略。双苯氟嗪(Dip)是由河北医科大学合成的新一代哌嗪类钙拮抗药,为氟桂利嗪的衍生物。前期实验研究证明双苯氟嗪可以阻断细胞外钙离子内流,保证细胞内钙稳定,可选择性地扩张脑血管,改善脑微循环;此类药中氟桂利嗪和洛美利嗪均可预防治疗偏头痛,而双苯氟嗪作为新一代哌嗪类钙拮抗药,故推测其也可能具有抗偏头痛作用。为此本实验旨在通过双苯氟嗪对偏头痛动物模型的防治作用进行研究,从而为其应用于临床提供客观而科学的依据。目的:观察双苯氟嗪对实验性偏头痛的防治作用及机制探讨。方法:⑴对模型小鼠挠头次数影响的研究:取昆明种小鼠120只,按体重随机分为正常对照组、模型对照组(0.5% CMC)、双苯氟嗪(Dip)1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg剂量组,以及氟桂利嗪3mg/kg阳性对照组,每组20只小鼠。对每鼠先进行灌胃给药,给药容积为0.2ml药物溶液/10g体重,每天一次,连续3天,正常对照组给予蒸馏水,模型对照组以等容量溶剂灌胃。在第3天给药30min后,除正常对照组给予等比例生理盐水外,其余各组均按10mg/kg皮下注射硝酸甘油(NTG)注射液(给药容积为0.2ml/10g)。而后观察记录10min内小鼠挠头的次数。⑵对模型小鼠痛阈和凝血时间影响的研究:取合格昆明种小鼠60只,按体重随机分为正常对照组、模型对照组(0.5% CMC)、双苯氟嗪(Dip)1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg剂量组,以及氟桂利嗪3mg/kg阳性对照组,每组10只小鼠。除正常对照组给予等比例生理盐水外,其余各组均按0.4mg/kg皮下注射利血平(给药容积为0.2ml/10g),每天一次,连续4天,而在造模开始第2天一并进行灌胃给药(容积为0.2ml药物溶液/10g体重),正常对照组给予蒸馏水,模型对照组以等容量溶剂灌胃,其余各组给予指定药物,连续5天。于最后一次给药1h后,热板法测定痛阈值,然后摘眼球取血测凝血时间。⑶对NO含量影响的研究:取健康SD大鼠60只,将大鼠按照随机性原则分为正常对照组、模型对照组(0.5% CMC)、双苯氟嗪(Dip)0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg剂量组,以及氟桂利嗪1.5mg/kg阳性对照组,每组10只。每鼠先进行灌胃给药,给药容积为0.5ml药物溶液/100g体重,每天一次,连续3天,正常对照组给予蒸馏水,模型对照组给以等容量溶剂。在第3天给药30 min后,除正常对照组给予等比例生理盐水外,其余各组均按10 mg/kg皮下注射硝酸甘油(NTG)注射液(给药容积为0.25 ml/100g)。4h后颈静脉取血并制备脑匀浆,按试剂盒操作说明分别测定血浆和脑组织中NO的含量。结果:⑴挠头的次数:双苯氟嗪(Dip)可以减少造模后10 min之内偏头痛小鼠的挠头次数,正常对照组、模型对照组、氟桂利嗪3 mg/kg组以及双苯氟嗪三个剂量组的挠头次数分别为:2.2±1.9、19.9±11.8、5.1±3.1、12.4±8.4、6.3±3.6、4.1±3.1。其中,正常对照组、氟桂利嗪3mg/kg组以及双苯氟嗪3mg/kg、10mg/kg剂量组与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。⑵痛阈值和凝血时间:双苯氟嗪(Dip)可以延长偏头痛小鼠凝血时间,提高其痛阈值。正常对照组、模型对照组、氟桂利嗪3mg/kg组以及双苯氟嗪三个剂量组的痛阈值分别为:17.2±4.7s、23.5±5.6s、34.5±4.9s、31.1±5.0s、33.9±8.2s、35.6±5.1s。与模型组比较,双苯氟嗪1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg剂量组以及氟桂利嗪组都具有显著性差异(P<0.01)。以上各组凝血时间分别为:43.7±0.7s、36.3±8.7s、42.7±0.8s、40.4±2.9s、42.3±2.2s、43.0±1.3s。结果显示:模型对照组凝血时间比正常对照组显著缩短(P<0.05),而双苯氟嗪三个剂量组以及氟桂利嗪组凝血时间长于模型组,具有显著性差异(P<0.05)。⑶血浆中NO含量的变化:双苯氟嗪(Dip)可降低由硝酸甘油诱发的偏头痛大鼠血浆中NO的含量。正常对照组、模型对照组、氟桂利嗪1.5mg/kg组以及双苯氟嗪三个剂量组血浆中NO的含量分别为:128±24μmol/L、200±21μmol/L、155±29μmol/L、170±19μmol/L、158±12μmol/L、147±16μmol/L。结果表明,正常对照组、氟桂利嗪1.5mg/kg组以及Dip 0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg剂量组均低于模型对照组(P<0.01)。⑷脑组织中NO含量的变化:双苯氟嗪(Dip)可降低由硝酸甘油诱发的偏头痛大鼠脑组织中NO的含量。正常对照组、模型对照组、氟桂利嗪1.5mg/kg组以及双苯氟嗪0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg剂量组脑组织中NO的含量分别为:3.3±0.9μmol/g pro、4.7±0.9μmol/g pro、3.4±0.6μmol/g pro、3.4±0.8μmol/g pro、3.3±0.8μmol/g pro、3.3±0.6μmol/g pro。结果表明,正常对照组、氟桂利嗪1.5mg/kg组以及Dip 0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg剂量组均低于模型对照组(P<0.01)。结论:⑴双苯氟嗪(Dip)可明显地减少偏头痛小鼠挠头的次数,延长凝血时间,提高其痛阈值,这在一定程度上表明了该药对偏头痛的治疗作用。⑵双苯氟嗪(Dip)可明显地降低由硝酸甘油诱导偏头痛模型大鼠血浆和脑组织中NO的含量,所以从理论上说,这不仅提示了偏头痛发作与NO有关,而且暗示NO含量降低遏止了偏头痛发病过程中一系列级联反应的恶性循环,使之始终趋于生理状态下的平衡水平,从而发挥止痛效果。