一、研究背景 癌症具有较高的发病率和致死率，严重威胁着人类的健康和生命。目前，化疗是治疗肿瘤的主要手段之一，因此新药的开发仍然是寻找攻克肿瘤的途径之一。目前，抗癌新药的开发对象主要包括天然产物、化学合成产物及牛物技术合成产物等。 本研究体外筛选了165个化合物的抗肿瘤活性，发现了19个化合物有较强的细胞毒活性；我们重点研究了1403P-3诱导KB、KBv200细胞凋亡的机制，ZSU44-2下调c—Myc从而导致HL60、K562细胞周期阻滞、端粒酶表达下降并发生凋亡的机制。 二、方法 使用包括敏感细胞及多药耐药细胞在内的多种人类肿瘤细胞，以MTT法对165个红树林内生真菌代谢产物进行体外抗肿瘤筛选筛选；Hoechst33258染色并在荧光显微镜下观察细胞的凋亡形态并计算凋亡率；DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡形成DNA梯形条带；双荧光染色并叠加观察NFkB p65在核内的变化；琼脂糖凝胶电泳观察药物与DNA的嵌合作用；以DiOC6(3)为探针，流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)；以DCFH-DA为探针，流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)；Annexin V-PI双染分析细胞凋亡率、PI单染分析细胞周期；Western Blot方法测定蛋白表达水平的变化；RNA干扰技术用于沉默c-Myc的表达。 三、结果 (一)、筛选了165个红树林内生真菌代谢产物的抗肿瘤活性，得到19个活性较好的化合物。 (二)、1403P-3的体内抗肿瘤作用及诱导KB、KBv200细胞凋亡的作用 (三)、ZSU44—2降低HL60、K562细胞c-Myc表达、周期阻滞、端粒酶表达下降并发生凋亡的作用及其作用机制的研究 四、结论1.筛选了165个红树林内生真菌代谢产物的抗肿瘤活性，得到19个活性较好的化合物。其中已经确定结构式的化合物ZSU44-2、1403P-2、1403P-3、1403P-30Ac、suo1、X1、X2、X3、H、H1及T5共11个，对KB及KBv200细胞的IC50小于20 μ M；未确定结构式的化合物A1、S—6-4、H7、H8、Xia-2、Xia-5、T4、T2，共8个，对KB及KBv200细胞的IC50小于10 μg／ml。这些化合物大都对敏感细胞KB及耐药细胞KBv200都有效，且化合物的结构类型多种多样，为进一步的研究开发提供了坚实的基础。对化合物进行的构效关系分析为结构改造提供参考。 2.1403P-3体外诱导KB、KBv200细胞凋亡的作用及体内抗肿瘤作用(1)1403P-3对敏感细胞KB及多药耐药细胞KBv200有相近的细胞毒作用并能诱导KB、KBv200细胞凋亡。 (2)1403P-3诱导凋亡作用与DNA嵌入无关。 (3)1403P-3能诱导KB、KBv200细胞线粒体膜电位下降、活性氧水平下降。 (4)1403P-3诱导KB、KBv200细胞的细胞色素c由线粒体释放至胞浆，并进而启动线粒体凋亡途径。 (5)1403P-3诱导KB、KBv200细胞的凋亡还与死亡受体途径相关，包括Caspase-8.-2的活化。 (6)1403P-3诱导KB、KBv200细胞凋亡的线粒体途径不依赖于死亡受体途径。 (7)1403P-3对KB细胞裸鼠移植瘤的生长有一定的抑制作用。 3.ZSU44-2降低抗肿瘤活性及其作用机制的研究(1)ZSU44-2能显著降低HL60、K562细胞c-Myc的mRNA、蛋白水平的表达。 ZSU44-2不能与c-Myc启动子的核心序列形成G四链体来干扰c-Myc基因的转录。降低c-Myc表达的机制可能与ZSU44-2降低NF-kB亚基p65在细胞核的量有关。 (2)ZSU44—2诱导HL60、K562的细胞周期阻滞于G1期，该作用与ZSU44-2降低HL60、K562细胞c-Myc表达有关。 (3)ZSU44-2诱导HL60、K562细胞端粒酶表达下降，该作用与c-Myc的下调有关。 (4)ZSU44-2诱导HL60、K562细胞发生凋亡。