第一部分HSV-1感染对人视网膜色素上皮细胞生长的影响 目的：建立单纯疱疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1，HSV-1)感染人视网膜色素上皮细胞(Retinalpigmentepithelialcell，RPE)的体外模型，观察HSV-1感染对体外培养RPE细胞生长的影响。 方法：以感染复数(multiplicityofinfection，MOI)为5的HSV-1(F株)感染体外培养的RPE细胞。用相差显微镜观察RPE细胞的形态变化；用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对RPE细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响；用PCR和免疫荧光法验证HSV-1感染RPE细胞是否成功。 结果：成功在体外建立了HSV-1感染RPE的细胞模型。HSV-1感染RPE细胞8h后出现病变，细胞形态开始变得细长和皱缩；感染24h后细胞病变更加明显，细胞间间隙增加，甚至可见多核巨细胞；感染48h后所有细胞均变圆，细胞开始出现脱落甚至死亡。MTT结果显示HSV-1感染RPE24h和48h后能抑制细胞生长(P<0.01)，细胞的抑制率分别为(16.37±3.28)％和(47.91±6.39)％；流式细胞仪检测发现HSV-1感染可影响RPE细胞的细胞周期，但对细胞凋亡无明显影响。 结论：HSV-1能感染体外培养的RPE细胞，抑制RPE细胞的增殖，并影响RPE细胞的细胞周期。 第二部分HSV-1感染对人角膜上皮细胞及其TGF—βs和SMADs表达的影响 目的：建立单纯疱疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1，HSV-1)感染人角膜上皮细胞(humancornealepithelialcell，HCE)的体外模型，观察HSV-1感染对HCE细胞中TGF—βs(TGF—β1、TGF—β2和TGF—β3)和SMADs(SMAD2和SMAD3)表达的影响。 方法：以感染复数(multiplicityofinfection，MOI)为5的HSV-1(F株)感染体外培养的HCE细胞。在HSV-1感染HCE细胞0、4、8、12和24小时后，用相差显微镜观察HCE细胞的形态变化；用RT—PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)检测HCE细胞中TGF—βs(TGF—β1、TGF—β2和TGF—β3)和SMADs(SMAD2和SMAD3)基因的表达；用间接免疫荧光法观察HCE细胞中TGF—β1、TGF—β2，SMAD3和磷酸化SMAD3蛋白的表达；同时还用ELISA的方法检测了HSV-1感染HCE细胞后TGF—β1蛋白的表达。 结果：HSV-1感染HCE细胞后，同正常HCE细胞形态相比较，感染后8hHCE细胞形态出现改变，细胞间间隙增加，可见较多多核巨细胞，感染24h后细胞病变更加明显，细胞开始出现脱落甚至死亡；RT—PCR结果显示TGF—β1在HSV-1感染HCE8h后表达开始降低，12h和24h降低更为明显(p<0.01)，SMAD3在HSV-1感染HCE12h和24h后表达显著降低，而TGF—β2、TGF—β3和SMAD2基因表达无明显变化；间接免疫荧光结果显示TGF—β1、SMAD3和磷酸化SMAD3蛋白在HSV-1感染HCE12h和24h后表达较正常HCE细胞降低，而TGF—β2蛋白表达无明显变化；同时ELISA结果亦显示HSV-1感染HCE12h和24h后TGF—β1蛋白表达降低。 结论：HSV-1能感染体外培养的HCE细胞，TGF—β1和SMAD3可能参与了HSV-1感染角膜上皮细胞的病理过程。 第三部分HSV-1感染人角膜上皮细胞后病毒miRNA的表达变化 目的：建立单纯疱疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1，HSV-1)感染人角膜上皮细胞(humancornealepithelialcell，HCE)的体外模型，观察不同浓度的HSV-1感染HCE细胞后病毒miRNA的表达变化。 方法：以感染复数(multiplicityofinfection，MOI)分别为5，1和0.1的HSV-1(F株)感染体外培养的HCE细胞，在HSV-1感染HCE细胞24小时后，用RealtimePCR方法检测HCE细胞中病毒miRNA(hsv—miR—H1～hsv—miR—H6)的相对量。 结果：在正常细胞中病毒miRNA均无表达；在HSV-1感染HCE细胞中仅hsv1-miR—H6有表达，其它miRNA无表达或表达非常低，且以MOI=0.1组作为对照时，MOI为5时hsv1-miR—H6的相对量为其的4.86倍，MOI为1时hsv1-miR—H6的相对量为其的2.13倍。 结论：HSV-1感染HCE细胞后hsv1-miR—H6表达较高，且具有病毒浓度依赖性。