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“俄色”为蔷薇科植物变叶海棠和花叶海棠的干燥叶,具有降血糖、降血脂、保肝等生理活性,表现出较高的药用和食用价值,但俄色对内皮细胞的的作用及其作用机理尚未见报道。本课题主要是通过高糖诱导脐静脉内皮细胞建立内皮损伤模型,研究俄色对内皮细胞的保护作用,并对其保护机制进行初步探索,为其在糖尿病血管病变中的应用提供理论依据。研究中,首先用液相质谱联用(LC-MS/MS)对俄色醇提物进行了物质分析。其中细胞实验分组及处理如下:空白对照组(5.5 mM正常浓度葡萄糖),高糖模型组(25 mM浓度葡萄糖),50μg/mL俄色组(50μg/mL俄色醇提物+25 mM浓度葡萄糖),100μg/mL俄色组(100μg/mL俄色醇提物+25 mM浓度葡萄糖),200μg/mL俄色组(200μg/mL俄色醇提物+25 mM浓度葡萄糖),400μg/mL俄色组(400μg/mL俄色醇提物+25 mM浓度葡萄糖)。对于给药组,用俄色预处理2 h,然后与模型组共同用25 mM高浓度葡萄糖诱导48 h,然后用相应试剂盒检测细胞内的活性氧(ROS),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)水平来评估细胞的氧化应激程度,另外用酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒和免疫印迹(Western Blot)检测细胞中的细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管间黏附因子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)来研究药物的抗炎活性。最后通过Western Blot检测细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)、Nrf2、细胞核转录因子-κB(NF-κB)相关蛋白的表达情况来研究俄色提取物的内皮保护机制。LC-MS/MS结果表明俄色醇提物中主要含有根皮苷、异槲皮苷和槲皮苷3种成分。细胞实验结果表明,俄色提取物可以降低由高糖诱导的ROS产生的增加(P<0.05),提高抗氧化酶SOD和GSH-px的活性(P<0.05),并具有明显的剂量依赖性。用俄色提取物对HUVEC进行预处理能够抑制高糖诱导的粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin分泌及表达的上调(P<0.05)。研究表明俄色提取物可以使HO-1的表达呈剂量依赖性增加(P<0.05)。同时,俄色提取物对HO-1的表达也具有一定的时间依赖性,并在12 h时,HO-1的蛋白表达量到达峰值。同时俄色提取物可以诱导HO-1上游转录因子Nrf2从细胞质向细胞核转移(P<0.05)。最后俄色提取物预处理可以显著抑制细胞质中IκB-α的磷酸化(P<0.05),抑制细胞核中p65的表达,从而抑制NF-κB的活化。上述结果表明,俄色提取物可以减轻高糖诱导的氧化应激和炎症,从而保护内皮细胞,而这种保护作用在一定程度上是通过活化Nrf2诱导HO-1表达,抑制黏附因子的上游的NF-κB信号通路实现的。