多种新型抗BLyS重组蛋白活性的研究

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BLyS,B淋巴细胞刺激因子,又叫做BAFF,是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员之一,在B淋巴细胞的增殖、成熟、维持 B细胞生理功能中起重要的作用。BLyS是通过和其三个受体 BCMA、TACI、BR3相互作用而发挥其生物学功能的。研究发现,机体中BLyS过量表达可引起诸如类风湿性关节炎,系统性红斑狼疮,综合干燥征等疾病的发生。多种BLyS拮抗剂肽被用于治疗小鼠及人类自身性免疫疾病的研究,并取得良好的效果。之前,我们通过计算机设计了多种的B LyS拮抗肽如BC、BA、TA和TC等,结果表明:这些肽可以很好的抑制BLyS与TACI-Fc或BCMA-Fc的结合;814是通过噬菌体库筛选得到的另一种与BLyS有很好亲和力拮抗肽。为了保持肽的稳定性,本实验中,我们利用基因工程技术将拮抗肽与人IgG1的Fc片段结合组成重组质粒,利用原核表达系统获得多种新型抗BLyS融合蛋白,并用ELIS A的方法对其活性做了进一步研究。具体研究结果如下:  1构建并纯化了BCMA-Fc-Myc融合蛋白,竞争性ELISA结果表明, BCMA-Fc对BCMA-Fc-Myc和BLyS的结合抑制率到达80%。建立肽-Fc融合蛋白竞争性抑制BCMA-Fc和BlyS结合能力的评价标准。  2构建并获得了无关肽(NP)与Fc融合蛋白表达载体(pET30a-NP-Fc)以及pET30a-BP-Fc、pET30a-BA-Fc、pET28a-3-BP-Fc和pET28a-3-814-Fc融合蛋白。  3利用间接性ELISA分别对以上重组蛋白进行活性分析,证明了这些蛋白与BLyS均具有良好的结合能力,且pET28a-BP-Fc融合蛋白与BLyS结合活性强于pET28a-BC-Fc融合蛋白, pET28a-3-BP-Fc活性好于pET28a-BC-Fc, pET30a-814-Fc活性好于pET28a-3-814-Fc。
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