论文部分内容阅读
1.目的：观察碳水化合物反应元件结合蛋白（carbohydrate response element binding protein, ChREBP）在糖尿病大鼠视网膜组织中的表达变化，并初步探索其在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)中作用的分子机制。 2.方法：取7周龄SPF级雄性SD大鼠60只，随机分成糖尿病（diabetes mellitus, DM）组和对照组。DM组大鼠给予一次性腹腔注射1%链脲佐菌素（streptozocin, STZ）（60mg/kg），于一周后测量血糖高于16.7mmol/L者视为造模成功；给予对照组大鼠等量的柠檬酸盐缓冲液。造模后每月监测血糖变化，约3月后麻醉处死大鼠。取大鼠视网膜组织，使用qRT-PCR法及Western Blot检测ChREBP和硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin-interacting protein, TXNIP)在两组大鼠视网膜中的表达变化；取大鼠完整眼球，固定脱水后行冰冻切片，利用HE染色观察两组大鼠视网膜的病理变化；利用免疫荧光染色检测ChREBP在两组大鼠视网膜中的分布变化。培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs），通过使用染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,ChIP）验证高糖环境下ChREBP对TXNIP基因表达的调节。 3.结果：糖尿病大鼠造模成功，与对照组相比，DM组血糖持续偏高并保持相对稳定；同时生长缓慢，体重始终偏低。HE染色显示DM组大鼠已经出现DR早期的病理变化。Western Blot和qRT-PCR检测显示DM组大鼠视网膜中ChREBP、TXNIP基因mRNA及ChREBP蛋白的表达均较对照组有所升高。免疫荧光染色结果也显示ChREBP在DM组大鼠的视网膜组织表达较对照组大鼠增加，并出现核转移。ChIP证实在高糖环境下，HUVECs中ChREBP与TXNIP基因间结合作用增强。 4.结论：在糖尿病大鼠视网膜组织中，ChREBP表达增加，并出现核转移；其在高糖环境下与靶基因TXNIP结合增强，从而进一步促进后者转录表达。提示ChREBP可能通过调节TXNIP的表达参与DR的发生发展。