肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是一种发病率较高且预后较差的恶性肿瘤,而中国是 HCC 的高发区域。本实验室利用代表性差异显示(Representational difference analysis, RDA)技术,寻找在 HCC 组织中表达发生改变的基因,并对其中的一些基因进行了细胞功能学研究。另外,本实验室还利用自建的 cDNA array 技术平台,分析了 HCC 与胚胎肝脏的基因表达谱,比较肿瘤发生机制与器官发生机制的异同。本论文就是围绕这两个方面展开论述的。 论文的第一章首先简要地描述了利用RDA技术获得在HCC中上调的基因,然后对其中的一个已知基因—上游结合因子(Upstream binding factor, UBF),进行了功能学研究。结合其他的检测技术,UBF 基因被证明在大约 66% (19/29)的 HCC 组织中上调。当 UBF 基因在人的肺成纤维细胞中过量表达时,可加快细胞生长;而用反义寡聚核苷酸在人的肝癌细胞中抑制 UBF 基因的表达时,可降低细胞在软琼脂糖中的形成克隆的能力并最终导致细胞死亡。值得注意的是,UBF 基因的表达还可提高细胞对抗肿瘤药物顺铂的敏感性。这提示了 UBF 基因对细胞的生存是非常重要的,而且它有成为抗肿瘤药物的作用靶点和临床用药 i<WP=3>中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所博士学位论文 论文摘要选择标记物的潜力。论文的第二章是对由 RDA 技术获得的在 HCC 中上调的未知基因—SVH 基因的功能学研究。我们完成了该基因的克隆,还发现 SVH 基因存在选择性剪切,四种剪切产物分别被命名为 SVH-A, B, C 和 D。运用定量实时 PCR 技术,发现只有 SVH-B 在大约 60% (28/46)的 HCC 组织中上调,而其它的剪切产物在 HCC组织中的表达没有一致性改变。当 SVH-B 在人的肝细胞株 QSG-7701 细胞中过量表达时,细胞的生长加快并在裸鼠中的成瘤能力增加;相反,用反义寡聚核苷酸来特异性抑制 SVH-B 在人的肝癌细胞株 BEL-7404 细胞中的表达时,可诱导凋亡的产生。这提示了 SVH 基因的不同的剪切产物具有不同的生物学功能,而且SVH-B这一特别的剪切亚型可能在HCC产生的过程中扮演了重要的角色。论文的第三章是利用含 5612 个基因/clusters 的 cDNA array, 对人的造血期的胚胎肝脏,成年正常肝脏及 HCC 组织的基因表达谱进行了比较。阶层聚类分析显示,这些样品按各自的生理状况聚类为三种类型:胚胎,成年正常和肿瘤。进一步分析在 HCC 发生和肝脏正常发生这两个过程中表达量有改变的基因,发现在两个过程发生同向变化的基因多与蛋白质表达和代谢相关;而仅在其中的一个过程中发生变化的基因多参与了细胞的信号转导/增殖和 mRNA 的转录。这揭示了在 HCC 发生过程和造血期的胚胎肝脏发育过程中,存在着独特的转录激活机制。