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肝癌是世界上最常见的致死性肿瘤之一,每年影响超过一百万人,居世界肿瘤死亡率的第三位。肝癌对化疗、放疗不敏感,术后易复发,预后较差。因此,迫切需要新的治疗方法。肿瘤干细胞理论的出现,为肝癌的治疗开拓了新的道路。肿瘤干细胞是存在于肿瘤细胞中数量极少的一部分细胞亚群,它们具有自我更新和无限分裂的能力,比普通肿瘤细胞更加抵抗常规放化疗,与肿瘤复发和再生密切相关。因此,靶向清除肿瘤干细胞可能就是治愈肿瘤的关键。目前,诱导分化治疗是研究较多的一种靶向治疗肿瘤干细胞的疗法。抑瘤素M是一种多功能的细胞调节因子,研究发现抑瘤素M可以诱导肝癌干细胞分化,并且可以增加对传统化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性。盐霉素是一种兽用抗生素,由于其对肿瘤干细胞的抑制作用,近年来越来越受到研究者的关注。研究表明,盐霉素可以降低肝癌细胞的增殖率,促进其凋亡,同时下调CD133~+干细胞亚群的百分比。本实验以CD133为肿瘤干细胞筛选标志,通过免疫磁珠法从人肝癌细胞Hep G2细胞系中筛选出CD133~+Hep G2肝癌干细胞,拟联合抑瘤素M与盐霉素作用于CD133~+Hep G2肝癌干细胞,探讨是否可以更加显著地诱导肝癌干细胞分化。结果显示,筛选所得的CD133~+Hep G2细胞在含20ng/ml b FGF、20ng/ml EGF、2%B27的无血清DMEM/F12培养基呈悬浮生长状态,由单细胞逐渐生长为细胞微球;经含血清的培养基诱导后,细胞微球开始贴壁生长;在软琼脂固体培养基中,分选后的单细胞可以继续生长形成克隆;对分选获得的肝癌干细胞分别给予OSM、Sal和OSM+Sal处理,结果显示,OSM与Sal联合用药可以显著抑制肝癌干细胞的增殖和侵袭能力;Annexin-V-FITC双染法、JC-1法和Western Blot法检测凋亡可见联合用药组发生凋亡的细胞更多,线粒体膜电位下降的幅度更大,caspase-3的表达更多,提示联合用药诱导的凋亡作用高于单独作用组;进一步对药物作用后肝癌干细胞分化相关标志物进行检测,结果显示,肝癌干细胞表面标志物CD133的表达水平以及干性相关基因的表达水平均显著下调,肝癌标志物AFP的表达水平显著下调,肝细胞标志物ALB的表达水平显著上调,提示联合用药能够更加显著地诱导肝癌干细胞发生分化。综上所述,抑瘤素M联用盐霉素能够更加显著抑制肝癌干细胞的增殖,诱导肝癌干细胞分化,促进其凋亡。本研究为靶向治疗肝癌干细胞的研究提供了新的思路。