论文部分内容阅读
目的：评估EBV相关性鼻咽癌中特异性CTL的免疫应答,探讨其在鼻咽癌的发生发展中的作用,为鼻咽癌的细胞免疫治疗及肿瘤多肽疫苗开发提供一定的实验依据.
方法：收集31例初诊鼻咽癌患者及17例EBV健康携带者(对照)外周血,所有鼻咽癌患者均经病理确诊,采用密度梯度法分离所有PBMCs,采用多聚酶链式反应.序列特异性引物(PCR.SSP)技术对所有标本进行组织配型,根据组织配型结果,应用A*02-CLG、A*02-GLG、A*02-FLY、A*02-LLW四个的四聚体分别检测11例HLA-A*02阳性的鼻咽癌患者和7例HLA-A*02阳性EBV健康携带者PBMCs中EBV抗原表位特异性CTL频数.同时应用ELISPOT方法检测PBMCs针对FLY、LLW两条肽段产生IFN-γ的抗原表位特异性CTL频数.另外,应用荧光定量PCR和ELISA方法分别检测27例鼻咽癌患者和17例健康对照血清中的EBV-DNA拷贝数和EA-IgA、VCA-IgA滴度.统计采用SPSS12.0分析软件进行分析,具体采用卡方检验、t检验及Spearman相关性检验进行分析,当P<0.05,认为有统计学意义.
结果：1.鼻咽癌组中,A*02-CLG、A*02-GLG、A*02-FLY、A*02-LLW四个四聚体所检测的抗原表位特异性CTL频数(﹪)均数分别为0.11±0.15﹪,0.12±0.17﹪,0.08±0.08﹪,0.07±0.06﹪;同时,健康对照组中相应的均数分别为0.26±0.17﹪,0.23±0.16﹪,0.34±0.27﹪,0.22±0.11﹪.经统计学分析,FLY、LLW表位特异性CTL在鼻咽癌组和健康对照组之间有显著差异(P<0.05).
2.鼻咽癌组中A*02-FLY tetramer检测结果与其血清中EBV-DNA拷贝数的对数值成负相关(r=-0.893,P<0.05),而A*02-CLG、A*02-GLG、A*02-LLW三个四聚体检测结果与其血清中EBV-DNA拷贝数对数值无相关性.
3.鼻咽癌组ELISPOT法检测针对FLY、LLW两条肽段检测产生IFN-γ的CTL频数均数分别为3.0±3.0、3.8±2.2(SFC/10<6>PBMCs),健康对照组相应的频数均数分别为14.3±7.0、9.5±2.5(SFC/10<6>PBMCs),两组之间存在显著差异(P<0.05).
4.ELISPOT法检测针对FLY、LLW两条肽段检测产生IFN-γ的CTL频数结果与四聚体法检测结果之问都具有相关性(FLY:r=0.901,P<0.01;LLW::r=0.889.P<0.01).
5.取血清中EBV.DNA拷贝数的对数值,对数值均数在鼻咽癌组和健康对照组中分别为3.30±0.22、4.52±0.88,两组之间无显著差异(P=0.065).
6.鼻咽癌患者血清中EA.IgA、VCA-IgA、EBV-DNA检出率分别为63﹪、85.2﹪、92.6﹪,而健康对照组中相应的检出率分别0﹪、0﹪、11.8﹪,三个指标的检出率在两组之间均存在显著差异(P<0.001).
结论：
1.鼻咽癌患者外周血中FLY、LLW表位特异性CTL频数低于健康对照.提示该两个抗原表位特异性CTL的缺乏在鼻咽癌的发生发展中可能起一定的作用.
2.鼻咽癌患者和健康对照外周血中特异性CTL可与EBV共存,鼻咽癌组中A*02-FLY四聚体检测结果与其血清中EBV-DNA拷贝数的对数值成负相关,提示该表位特异性CTL可能在清除:EBV中起着优势作用.
3.四聚体技术能方便敏感检测鼻咽癌患者和健康对照中抗原表位特异性CTL.ELISPOT技术是分析细胞功能的重要方法,与四聚体方法有很好的相关性,两者结合起来可以深入分析特异性CTL在EBV病毒相关肿瘤中的作用,可为细胞免疫治疗监测及疗效评价提供有力的手段.
4.鼻咽癌患者血清中EA-IgA、VCA-IgA、EBV-DNA检出率均高于健康对照.