胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)输注对MRL/lpr小鼠作用的实验研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woshimaizi
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目的:在减低剂量放射线预处理方案下,观察来源于C57BL/6孕鼠的FNPB对MRL/lpr小鼠的作用及其可能机制。方法:1.收集C57BL/6孕鼠FNPB细胞,密度梯度离心法分离FNPB中的MNC并计数MNC含量,然后输注MNC至20周龄MRL/lpr小鼠。2.观察各组MRL/lpr小鼠GVHD表现:包括小鼠体重、体位、活动能力、毛发变化及大小便情况。3.分析各组MRL/lpr小鼠死亡率、体重(20周龄、24周龄、28周龄和32周龄)和脾脏指数(32周龄)改变情况;采用ELISA法检测各组MRL/lpr小鼠在20周龄、24周龄和32周龄时血清抗ds-DNA抗体、ANA浓度;采用ELISA法检测各组MRL/lpr小鼠在32周龄时血清IL-17和TGF-β浓度;采用全自动生化分析仪检测MRL/lpr小鼠在20周龄、24周龄和32周龄时血清肌酐浓度;采用考马斯亮蓝法检测MRL/lpr小鼠在20周龄、24周龄、28周龄和32周龄时24h尿蛋白;采用流式细胞仪分析各组MRL/lpr小鼠在32周龄时外周血Th1、Th2、Th17、Treg和CD8+T细胞。32周龄时处死MRL/lpr小鼠,进行MRL/lpr小鼠肾脏病理切片,H.E染色镜检分析;并采用原位杂交法检测MRL/lpr小鼠肾内血管平滑肌细胞中的microRNA-145表达情况。结果:1.FNPB中MNC浓度为9.5×106/ml,细胞存活率97%以上。2.在移植组中所有小鼠均活泼地存活到32周龄直至被处死,无诸如脱毛、腹泻、皮疹、出血、消瘦等明显GVHD表现;但放疗组小鼠在接受放射线照射后第24天出现头、颈、背部毛发开始变浅、变灰,至第55天,这些部位的毛发明显变白。3.对照组和放疗组小鼠生存率差异无统计学意义(P>0.05);移植组小鼠生存率较对照组、放疗组小鼠明显升高(P均<0.05)。4.(1)在32周龄时,放疗组和移植组小鼠脾脏指数较对照组均明显减小(P均<0.05);放疗组和移植组之间无明显差异(P>0.05)。(2)在20周龄、24周龄时,三组小鼠在平均体重、血清抗ds-DNA抗体、ANA和血清肌酐无差异(P均>0.05);在28周龄时,三组MRL/lpr小鼠平均体重无差异(P均>0.05);在32周龄时,放疗组和移植组小鼠平均体重均明显高于对照组(P均<0.05),但是移植组小鼠体重较放疗组稍增加(P>0.05);在32周龄时,放疗组和移植组小鼠血清抗ds-DNA抗体和ANA均明显低于对照组(P均<0.05),但是在放疗组和移植组中血清抗ds-DNA抗体和ANA均无差异(P均>0.05);在32周龄时,移植组小鼠血清肌酐均明显低于对照组和放疗组(P均<0.05);同时,放疗组小鼠血清肌酐稍低于对照组(P>0.05)。(3)在20周龄时,3组MRL/lpr小鼠24h尿蛋白无差异(P均>0.05)。在24周龄和28周龄时,放疗组和移植组小鼠24h尿蛋白明显低于对照组(P均<0.05)。32周龄时,对照组和放疗组小鼠24h尿蛋白无差异(P>0.05);在移植组中,24h尿蛋白水平均明显低于对照组和放疗组(P均<0.05)。(4)与放疗组比较,移植组小鼠的白细胞从最低值上升至1.0×109/L的时间明显缩短(P<0.05);并且,移植组小鼠血小板最低值高于放疗组(P<0.05),血小板下降至最低值的时间以及从最低值上升至100×109/L的时间均明显低于放疗组(P均<0.05);与放疗组比较,移植组小鼠血红蛋白从最低值上升至100g/L的时间明显缩短(P<0.05)。(5)在32周龄时,与对照组比较,放疗组和移植组小鼠中CD4+T细胞的百分率明显降低、CD8+T细胞的百分率明显增加、CD4+/CD8+比值明显降低(P均<0.05)。并且,与对照组比较,放疗组和移植组中Thl细胞百分率明显增加、Th2细胞百分率明显降低、Th1/Th2比值明显增高(P均<0.05)。但是,与放疗组比较,移植组中Th1细胞和CD8+T细胞稍增加、Th2细胞和CD4+T细胞稍下降(P均>0.05)。(6)在32周龄时,与对照组比较,放疗组和移植组Treg细胞均明显增加、Th17细胞均明显减少(P均<0.05);与对照组比较,放疗组和移植组Treg/Th17比值明显增加P均<0.05)。但是,在放疗组和移植组中,Treg细胞、Th17细胞和Treg/Th17比值无差异(P均>0.05)。(7)32周龄时,与对照组比较,放疗组和移植组小鼠血清TGF-β的浓度明显增加(P均<0.05);但是放疗组和移植组间无差异(P>0.05)。与对照组比较,放疗组和移植组小鼠血清IL-17浓度明显减少(P均<0.05);但在放疗组和移植组之间无差异(P>0.05)。(8)在MRL/lpr小鼠中,其肾脏血管平滑肌细胞中存在microRNA-145的表达,但是在肾内血管的内膜和外膜中没有发现明显microRNA-145表达。(9)与对照组和放疗组MRL/lpr小鼠相比,microRNA-145在移植组MRL/lpr小鼠肾脏血管平滑肌细胞中表达均明显增加(P均<0.05);与对照组MRL/lpr小鼠相比,在放疗组MRL/lpr小鼠肾脏血管平滑肌细胞中表达稍增加(P>0.05)。(10)在对照组小鼠肾脏中可见肾小球系膜细胞与系膜基质均明显增生,放疗组和移植组小鼠均局灶轻度增生;在对照组小鼠肾小管明显空泡变性并刷状缘脱落;放疗组小鼠部分毛细血管袢开放不良,部分肾小管空泡变性;在移植组小鼠肾脏中毛细血管袢开放良好,少许肾小管可见空泡变性。结论:1. FNPB输注对MRL/lpr小鼠的治疗能够发挥极好的GVA效应,同时FNPB治疗MRL/lpr小鼠也是安全的,没有造成明显的GVHD表现。2. FNPB输注能够较快促进经放射线预处理的MRL/lpr小鼠的造血系统恢复,并对MRL/lpr小鼠具有免疫调控作用。3. microRNA-145在MRL/lpr小鼠肾脏血管平滑肌细胞中存在表达,并且FNPB治疗能够提高MRL/lpr小鼠肾内血管平滑肌细胞中microRNA-145的表达。
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