桑叶中降血糖组分1-脱氧野尻霉素(DNJ)的富集与纯化研究

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1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是中药桑叶降血糖组分多羟基生物碱中的一种重要成分。本文以DNJ为对象,系统地研究了其分析检测、富集与纯化方法。1.建立了用于DNJ含量测定的高效液相色谱-示差折光检测法,得到回归方程为Y=145.66 X—10.018(R2=0.9993),DNJ的线性范围为0.4~6.0 mg/mL,加样回收率实验的平均回收率为99.26%(RSD=1.35%,n=6)。该检测方法结果精确、重现性好、简便快速,可用于桑叶提取物及其制品的分析和质量控制。2.首次研究了陶瓷膜微滤与聚醚砜膜超滤结合技术富集桑叶水提物干浸膏中DNJ的方法,分别考察了他们的工艺参数,得到了微滤澄清与超滤富集实验的最佳工艺条件。陶瓷膜微滤澄清预处理实验,得到澄明度较高的透过液,蛋白质杂质基本除尽。最佳工艺条件为:孔径为0.2 μm Al2O3陶瓷膜,操作压力为2 bar,操作温度为35℃,料液浓度为10.0 g/L,当料液体积为最小循环体积(3 L)时,加入2 L去离子水进行洗脱,洗脱两次,最终所得透过液中DNJ含量为1.67%(桑叶水提物干浸膏中DNJ的含量为1.32%),得率为94.70%。聚醚砜膜超滤富集实验,取得了较好的效果。最佳工艺条件为:截留分子量为2.5 kDa的聚醚砜超滤膜,操作压力为30 bar,操作温度为35℃,料液浓度为10.0 g/L(为微滤时的料液浓度),当料液体积为最小循环体积(800 mL)时,加入800 mL去离子水进行洗脱,洗脱两次,最终所得透过液中DNJ含量为7.84%,转移率为89.29%,得率为88.06%。3.研究了树脂法纯化DNJ的方法,分别使用了AB-8大孔吸附树脂、001 × 7阳离子和201 × 7阴离子交换树脂,考察并优化了他们的工艺参数,得到最佳工艺条件。从D101、AB-8两种大孔吸附树脂中筛选出除杂效果较好的AB-8树脂,经AB-8树脂除杂实验所得干浸膏中DNJ的含量为8.18%,转移率为71.35%,得率为62.83%。001×7阳离子交换树脂纯化实验的最佳工艺条件为:过柱样液中DNJ的浓度为0.848 mg/mL,上样流速与洗脱流速为1 BV/h,洗脱溶剂0.5 mol/L氨水的用量为4 BV。经001×7阳离子交换树脂纯化实验所得干浸膏中DNJ的含量为19.81%,转移率为34.30%,得率为21.55%。201×7阴离子交换树脂纯化实验的最佳工艺条件为:过柱样液中DNJ的浓度为0.582 mg/mL,上样流速与洗脱流速为1 BV/h,洗脱溶剂去离子水的用量为6 BV。最终所得干浸膏中DNJ的含量为51.19%,转移率为56.97%,得率为12.28%。
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