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目的通过观察紧密连接蛋白Claudin-3、ZO-1及Occludin在失血性休克(hemorrhagic shock,HS)大鼠回肠组织中表达的变化及CORM-2对其调节作用,研究CORM-2对失血性休克大鼠回肠组织紧密连接蛋白Claudin-3、ZO-1及Occludin的作用及内在机制,为CORM-2用于临床上救治休克后肠黏膜屏障损伤提供新的治疗策略和理论依据。方法(1)60只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为HS组(B组,n=15)、CORM-2[A组(n=15,5mg/kg)]给药组、iCORM-2[D组(n=15,5mg/kg)药物灭活组、正常对照组(C组,n=15)。(2)制备失血性休克模型及分组:经颈动脉穿刺完毕后待平均动脉压MAP(mean arterial pressure,MAP)稳定10min后开始制备模型,从颈动脉放血或回注(MAP>40mmHg时放血,<35mmHg时回注)以维持实验大鼠MAP35-40mmHg间的休克状态120min。B组(HS组)术前45min腹腔注射同剂量溶于生理盐水的DMSO(5mg/kg)制备失血性休克模型;A组(CORM-2组)术前45min腹腔注射干预药物CORM-2(5mg/kg)制备失血性休克模型;D组(iCORM-2组)术前45min腹腔注射干预药物iCORM-2(5mg/kg),制备失血性休克模型,其中iCORM-2为CORM-2的灭活形式;C组(正常对照组)术前45min腹腔注射同剂量溶于生理盐水的DMSO(5ml·kg-1),仅给予颈动脉置管,不制备休克模型。(3)24h后处死各组大鼠,下腔静脉取血后离心分离出血浆、血清,用ELISA试剂盒检测各组大鼠血浆D乳酸和血清TNF-α水平。(4)取距离阑尾10公分的回肠组织固定包埋,用HE染色后光镜下观察肠黏膜病理变化,包括组织学检查、肠黏膜厚度及绒毛高度测量及肠黏膜损伤评分(Chiu′s);透射电镜下观察肠上皮细胞超微结构及紧密连接改变。(5)免疫组织化学法检测肠组织紧密连接蛋白Claudin-3、ZO-1及Occludin分布和表达。(6)Western blot法检测肠组织紧密连接蛋白Claudin-3、ZO-1及Occludin表达水平。结果1.各组大鼠回肠组织形态学的变化肉眼观察:C组回肠组织正常,未见明显的变化;B组和D组回肠组织肿胀,颜色呈暗红色;A组回肠组织轻度肿胀,颜色基本恢复正常,较B组和D组损伤明显减轻。光镜观察:C组回肠黏膜结构完整清晰,肠绒毛排列整齐、紧密,固有层腺体也十分完整;B组和D组回肠结构改变明显,肠黏膜绒毛出现水肿增粗甚至坏死脱落,固有层腺体细胞可见坏死、溶解;A组较B组和D组相比损伤明显减轻,回肠黏膜厚度、绒毛高度明显增加,Chiu,s评分显著降低(P<0.01)。电镜观察:C组回肠黏膜微绒毛排列丰富而且杯状细胞分泌活性强,细胞间连接紧密;B组和D组微绒毛结构破坏、部分消失,杯状细胞呈空泡状,回肠上皮细胞疏松脱落、排列混乱,紧密连接开放;A组回肠组织部分微绒毛已恢复正常结构,杯状细胞分泌活性增强,细胞间紧密连接基本完整,较B组和D组损伤明显减轻。2.各组大鼠血浆D乳酸及血清TNF-α的变化B组和D组较C组相比,血浆D乳酸明显升高(P<0.01),血清TNF-α水平也有明显升高(P<0.01);A组较B组和D组相比,血浆D乳酸水平明显降低(P<0.01),血清TNF-α水平也呈现下降趋势(P<0.01)。3.各组大鼠回肠紧密连接蛋白Claudin-3、ZO-1及Occludin的表达变化失血性休克导致大鼠肠屏障损伤,降低回肠上皮细胞Claudin-3、ZO-1及Occludin蛋白的表达(P<0.01)。经过CORM-2提前干预的大鼠,其回肠黏膜Claudin-3、ZO-1及Occludin蛋白表达升高(P<0.01)。结论CORM-2通过上调失血性休克大鼠回肠上皮细胞紧密连接蛋白Claudin-3、ZO-1及Occludin的表达,对失血性休克大鼠肠屏障有一定保护作用。