类风湿性关节炎(RA)是我国高发的一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。以关节滑膜炎及浆膜、心肺、皮肤、眼、血管等结缔组织广泛性炎症为主要表现,滑膜炎持久反复发作,可导致关节内软骨和骨的破坏,关节功能障碍,肢体严重畸形,甚至致残,在我国RA的患病率约为0.4%。RA的病因尚不明确,可能为遗传、环境、感染和免疫等因素共同作用的结果。目前的主要治疗原则是使患者获得尽可能长的完全缓解期,以非甾体抗炎药、免疫抑制剂、抗风湿类药等为主,对肝肾功能有损伤,因此更需要明确RA的病因及探索其新的治疗靶点。TH17细胞为新发现的CD4~+T细胞亚群,作为一个新型的辅助性T细胞亚群,具有独立的分化和发育调节机制,能产生IL-17A,IL-17F和IL-22等细胞因子。高水平分泌的IL-17A是TH17细胞标志的细胞因子。动物试验发现,TH17细胞在自身免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要调节作用。同时有资料显示,一些自身免疫病患者,如多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病和银屑病等存在着TH17细胞数量和(或)功能异常。本实验通过研究Th17细胞及其相关细胞因子在RA患者中的表达水平并探讨其临床意义,可能会对阐明RA的发病机制及探索新的靶向治疗起到一定的积极作用。第一节:RA患者外周血TH17细胞相关细胞因子的表达水平目的:通过检测血清中IL-17A的含量及外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17AmRNA的表达水平,研究其与疾病活动程度的关系,阐述TH17细胞在RA发病中的作用。方法:收集初诊确诊为活动期RA患者32例,男7例,女25例,平均年龄51±6岁;另设健康对照组30例,男9例,女21例,平均年龄47±4岁。应用酶联免疫吸附法(ELISA)及反转录PCR (RT-PCR)法,分别检测外周血血清中IL-17A水平和外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17AmRNA表达水平。结果:活动期RA患者血清中IL-17A水平(15.76±0.62) pg/ml与健康对照组(8.67±0.12) pg/ml比较,差异有统计学意义(t=3.82,P<0.05);活动期RA患者PBMC的IL-17AmRNA表达水平(1.94±0.46)与健康对照组(0.84±0.16)比较,差异有统计学意义(t=2.58,P <0.05);RA组血清IL-17A水平与mRNA表达水平呈正相关(r=0.7, P<0.05),且与疾病活动程度(DAS28)评分呈正相关(r=0.99, P <0.05)。结论:活动期RA患者体内PBMC的IL-17AmRNA表达水平及TH17细胞的主要效应性细胞因子IL-17A水平明显升高并与疾病活动程度呈正相关。第二节:RA患者外周血TH17细胞数量目的:通过检测RA患者外周血CD4~+IL-17+T细的比例,确定RA患者外周血TH17细胞的数量,研究其与疾病活动程度的关系。方法:病例组及对照组选择同第一节。以Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),一组不加刺激,另一组用(50ng/ml)佛波酯和(1ug/ml)离子霉素刺激4小时后,以抗CD4-PE和抗IL-17-FITC标记,流式细胞仪检测CD4~+IL-17+T细胞的数量。结果:活动期RA患者外周血CD4~+IL-17+T细胞比例(2.50±0.54)%与正常对照组(0.03±0.00)%比较,差异有统计学意义(t=5.82,P<0.01);但刺激组(3.23±0. 53)与非刺激组(2.50±0.54)比较,差异无统计学意义(t=1.4,P>0.05)。RA患者组CD4~+IL-17+T细胞数量与疾病活动程度(DAS28)评分呈正相关(r=0.96, P<0.05)。结论:活动期RA患者外周血TH17细胞的数量增多,且与疾病活动程度呈正相关。