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目的：丁苯酞为我国自主研发的国家Ⅰ类新药，其具有改善局部脑缺血大鼠模型脑梗塞和记忆减退的作用，并能降低脑缺血性脑水肿，改善全脑缺血小鼠脑能量代谢的作用。但是口服的肝脏毒性作用点尚不了解。要鉴定丁苯酞早期肝脏症状难度较大，因为对丁苯酞肝脏作用的发生、发展表现形式了解不够详尽。临床上作用的症状与肝功能下降程度不平行。由于对丁苯酞肝脏作用发生的作用点及分子机制知之甚少，故预防和药物治疗方向了解不够，目前尚缺乏明确的治疗措施。丁苯酞早期肝脏作用研究目前处在个别分子基因水平终点上，而高通量、多终点基因芯片技术将为寻找暴露低于临床中毒症状剂量的丁苯酞肝脏作用机制提供研究平台。本实验目的是观察丁苯酞对大鼠口服10天以及停药10天后肝脏的差异基因表达情况，为丁苯酞毒性分子机制研究及制定中毒治疗方案提供科学依据。
方法：⑴将丁苯肽以不同剂量给大鼠口服灌药，作为实验组，灌服自来水大鼠为对照组。灌药后在不同时间点如，3天、10天、20天，10+10天将动物处死，取肝脏组织及其它脏器-70℃冰箱保存备用。⑵按照一步法提取不同实验组及对照组大鼠肝脏的RNA，参照Schena方法逆转录标记cDNA探针并纯化。用Cy3-dCTP荧光标记对照组样本，Cy5-dCTP荧光标记实验组样本，乙醇沉淀后将探针混合，溶于杂交液中。表达谱芯片由北京博奥生物芯片有限公司提供，芯片类型BiostarR-40s，大鼠芯片，该型芯片包含4094靶基因。⑶将预杂交的基因芯片和待杂交的探针分别在95℃水浴中变性30 s和2 min，将探针加在芯片上，于杂交箱内42℃杂交过夜（15-18 hrs）。洗涤，晾干。⑷将杂交好的玻片浸入装有洗涤液的染色缸中洗涤10 min，冲洗，晾干后扫描。⑸用扫描仪对芯片进行扫描，获取基因表达的荧光信号强度值。用图像处理软件对杂交的芯片扫描图像进行数字化处理，计算Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值，通过比值的范围确定有差异表达的基因，并分析差异基因的种类。
结果：①正常剂量（60mg/kg天）用药3天，可见AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）皆呈上调变化，其上调的幅度不大。而X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）没有受到影响，未产生基因的变化。②正常剂量（60mg/kg·天）给药10天，AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）基因产生继续上调，其上调的幅度大于正常剂量三天组，BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）皆呈上调变化且上调幅度稍大与上组。X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）而没有受到影响，未产生基因的变化。③正常剂量（60mg/kg·天）给药20天，可见AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18），X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）皆产生上调的变化。AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）的上调幅度较前两组皆幅度加大。④正常剂量（60mg/kg·天）服药10天停药10天，AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）还是呈上调的变化。而BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）皆恢复正常。证明10天停药后该药物对AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）仍有持续影响，而对BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）的影响则消失。同时可见X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）呈下调变化。⑤高剂量（120mg/kg·天）给药3天基因变化情况。所有四个基因AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18），X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）皆成上调变化。其上调幅度皆大于正常剂量三天组。证明了药物剂量的增加对于这几个基因的影响作用亦增加。⑥高剂量（120mg/kg·天）给药10天基因变化情况。AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）皆继续呈上调，而X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）恢复正常。与一倍剂量组相比，Y387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）的上调程度有所增加。⑦高剂量（120mg/kg·天）给药20天基因变化情况。AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18），X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）皆呈上调变化。其中X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）的上调幅度较正常剂量20天时明显增加。⑧高剂量（120mg/kg·天）给药10天停药10天的基因变化情况。AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）继续成上调变化。而其他三个基因BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18），X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）则恢复正常。可见对于AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）药物的影响较其他三个基因持续，且不易恢复。⑨四倍剂量组（240mg/kg·天）给药3天基因变化情况。所有四个基因AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）， X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）皆产生上调的变化。而其中X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）的上调幅度很大。与前给药相比，高剂量初始对于X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）的影响大于对于其他三个基因。⑩四倍剂量组（240mg/kg·天）给药10天基因变化情况。所有四个基因AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），BC089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18），X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）皆产生上调的变化。其中AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶）的上调幅度明显加大，而X63545（p450酶2家系b亚科多肽12）上调幅度有所降低。
结论：丁苯肽大鼠灌胃研究大鼠肝内4094个基因变化，其中一些基因m RNA发生变化，不同剂量丁苯肽作用下基因mRNA发生变化也不同。其中有几个基因的变化最显著，这几个基因在人体内及药物代谢中都有着重要意义。这些基因分别是：AY387051（11-β-羟类固醇脱氢酶），X63545（p450酶2家系b亚科多肽12），bc089765（p450酶2家系a亚科多肽2），x79991（p450酶2家系a亚科多肽18）。由于丁苯肽对于基因的影响，在应用丁苯肽同时应用地塞米松及克霉素时应慎重，最好这些药物不同时应用，从而避免药物间的相互作用。