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全反式维甲酸(ATRA)联合以蒽环类药物为主的化疗是临床上急性早幼粒细胞白血病(APL)诱导缓解的首选疗法，能够使患者的初治完全缓解率达80％-95％。然而ATRA耐药性的产生常常导致APL化疗失败，严重影响了ATRA的治疗效果。而现有的对ATRA耐药细胞治疗策略均不完善。因此，寻求ATRA耐药细胞的有效治疗措施是目前APL研究的一大方向。本论文构建APL细胞的ATRA耐药细胞株，并以其作为靶细胞，采用新型基于微流控的噬菌体筛选技术，以期获得能够与ATRA耐药性APL细胞特异性结合的多肽序列，获得的主要试验结果如下: 1、APL细胞ATRA耐药株的构建及鉴定 采用浓度递增间歇诱导法，以ATRA对两株APL细胞HL-60、NB4进行体外诱导筛选，成功获得了具有稳定耐药性状的细胞株HL-60R、NB4R。同时发现，与亲代细胞相比，耐药细胞株的一些生物学特性发生了明显变化:①体积有所增大，且大小不一;②生长增殖速度减慢、群体倍增时间延长;③对其它多种化疗药物产生了一定程度的耐药性，即具有一定的多药耐药性状。 2、ATRA耐药性APL细胞特异性结合多肽的筛选及鉴定 以构建的ATRA耐药性APL细胞作为正筛细胞、亲代APL细胞作为负筛细胞，采用基于微流控的噬菌体筛选方法进行了全细胞消减筛选，成功获得了四个一致性较高的噬菌体单克隆，所展示的外源十二肽序列分别为:27号(SPTSSFQVGTFA)、26号（TLTTHGRLFESN）、5R5号（WAITKPAPAAHP）、5R13号(TSTTFKSHLDHH)。 一方面，同源比对结果显示，27号、5R5号、5R13号序列分别与层粘连蛋白(LN)、神经细胞粘附分子(NCAM)、钙粘蛋白(cadherin)具有较高的同源性，而NCAM、cadherin为同类亲和性蛋白，据此推测用作筛选的ATRA耐药性APL细胞表面可能高表达这三种蛋白相应的受体分子，即层粘连蛋白受体(LR)、NCAM、cadherin;文献查阅发现，LR、NCAM、cadherin在多种耐药肿瘤细胞表面显著上调表达，并与细胞对化疗药物的耐受性相关;同时PCR初步鉴定结果显示，NCAM-mRNA在HL-60R细胞中明显表达，而在HL-60细胞几乎不表达，这与生物信息学预测推断的结果相一致。 另一方面，噬菌体单克隆与靶细胞的结合特异性试验（滴度测定法、免疫荧光法、流式细胞实验）结果均证实，27号、26号、5R5号、5R13号噬菌体单克隆能够与ATRA耐药性APL细胞HL-60R、NB4R特异性结合;其中5R5号、27号噬菌体展示多肽能够与另一急性淋巴细胞白血病多药耐药株CEM/C1结合，表明这两个噬菌体展示多肽可能是耐药细胞的广谱结合肽。 综上所述，我们首先采用浓度递增间歇诱导法，成功构建了两株APL细胞HL-60、NB4相应的耐药细胞株HL-60R、NB4R。并且以该ATRA耐药性APL细胞作为正筛细胞、亲代APL细胞作为负筛细胞，进行了基于微流控的全细胞消减筛选，成功获得了四个高度富集的噬菌体单克隆;且体外多个实验证实，这四个噬菌体展示多肽均能与ATRA耐药性APL细胞HL-60R、NB4R特异性结合;且其中两个噬菌体展示多肽可能是耐药细胞的广谱结合肽。上述研究结果有望为ATRA耐药性APL细胞的靶向治疗提供特异性载体，为开发新的ATRA耐药逆转策略奠定实验基础。