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研究背景:肿瘤局部热疗是指用加热的方法使人体癌变处的局部温度升高从而杀死癌细胞的一种治疗方法。热疗可通过升温的方式杀伤肿瘤细胞,并刺激机体免疫系统,增强机体对肿瘤的免疫力,但热疗促进肿瘤宿主免疫反应的机理尚不准确。热疗可以促进肿瘤组织合成热休克蛋白,后者是一种保护性因子,可增强其对外界刺激的抵御能力,也可与多种肿瘤抗原形成复合物,激发机体免疫系统,提高机体抗肿瘤免疫功能,进一步认清热疗中肿瘤细胞表达热休克蛋白的主要作用将为肿瘤治疗开辟新途径。研究目的:1.观察不同热疗剂量对体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞的杀伤作用,筛选合适的杀伤B16细胞的热疗剂量。2.观察不同热疗剂量对体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)表达的影响,筛选能够促进B16细胞表达HSP70的最佳热疗剂量。3.利用筛选的最佳热剂量加温C57小鼠移植瘤,研究不同热剂量对荷瘤小鼠生存的影响。4.利用筛选的最佳热剂量加温C57小鼠移植瘤,研究不同热剂量对荷瘤小鼠IL-2和移植瘤HSP70表达的影响。研究方法:1.培养基培养B16细胞,设立18个热疗剂量实验组和1个37℃对照组,水浴加热实验细胞,倒置光学显微镜观察热疗后细胞形态,MTT法和台盼蓝法检测热疗后细胞存活率。2.水浴加热实验细胞,免疫组织化学法(Immuno-histochemistry,IH)检测热疗后B16细胞HSP70的表达情况。3.根据体外实验结果,筛选出若干合适的热疗剂量,加温荷瘤小鼠移植瘤,观察荷瘤小鼠生存期变化,放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)法检测荷瘤小鼠外周血白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)浓度变化,IH法检测热疗对荷瘤小鼠移植瘤HSP70表达的影响。研究结果:1. MTT和台盼蓝结果显示,除加温到40℃的各组细胞外,其他各加热温度组的细胞受热后其存活率均随受热温度的升高而降低,同一温度时存活率随受热时间的延长而降低,加温到40℃的细胞存活率随着时间的延长表现为先是降低(30min),然后升高(60min和90min),最后降低(120min)。2. IH结果发现,热疗后HSP70的表达量明显提高,表达强度随加热的温度和时间均有较大的相关性。当加热持续时间一定时,HSP70的阳性表达率随温度的升高而提高,直至细胞受热损伤严重未有表达功能而停止。当加热温度一定时,HSP70的阳性表达率随时间的延长而提高,直至细胞受热损伤严重未有表达功能而停止。3.与对照组相比,热疗后,荷瘤小鼠生存期明显延长,以53℃～55℃组变化最为明显;荷瘤小鼠外周血IL-2浓度明显增加,但与热疗剂量并无相关性;荷瘤小鼠移植瘤HSP70表达明显增加。结论:1.加温可诱导B16细胞死亡,且随着热疗剂量的增加,细胞存活率减低,但加热温度为40℃时,存活率随着时间的延长表现为先是降低,然后升高,最后降低,这与传统观点有所不同。2.体内研究表明,加温治疗可以有效杀伤荷瘤小鼠移植瘤,与对照组相比,加热治疗后,荷瘤小鼠生存期明显延长。3.加温可以诱导小鼠B16离体和移植瘤细胞HSP70表达明显增加,同时可促使荷瘤小鼠分泌免疫刺激因子IL-2,两者可能激活了小鼠免疫系统,延长了荷瘤小鼠的生存期。