NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)转录因子在植物的生长发育和胁迫耐受性方面发挥着重要作用,但在日本结缕草中的研究还未详细展开。本文旨在研究日本结缕草(Zoysia japonica)中的NAC转录因子ZjNAC3基因的基本功能及其启动子的活性,同时探究ZjNAC3基因过表达对植物耐盐性的影响。研究结果如下:1、从日本结缕草中克隆获得了ZjNAC3基因,编码区全长1167 bp,生物信息学分析表明ZjNAC3基因的N端有NAM保守结构域,属于NAC超家族。利用实时荧光定量技术进行基因表达分析,发现ZjNAC3基因在日本结缕草的根、茎、叶中均有表达,且在日本结缕草叶片中的表达量最高,同时在衰老叶片中的表达量最高。ZjNAC3的表达受到ETH、ABA、Me JA激素和干旱、高盐的调控。通过烟草瞬时表达的方法对ZjNAC3进行亚细胞定位,结果显示ZjNAC3定位在细胞核。2、通过转录自激活验证,ZjNAC3蛋白具有转录自激活活性。蛋白分段实验结果表明其N端不具有转录激活活性,而C端具有转录自激活活性。利用酵母双杂筛库技术初步筛选出16个候选基因,并对其进行了生物信息学分析,分析表明这些候选基因不仅参与糖酵解、三羧酸循环,还参与逆境胁迫响应、病原体防御和植物生长发育等其他生理生化过程。3、同时克隆了ZjNAC3基因的启动子序列1622 bp,作用元件分析表明启动子中含有多种响应植物激素和胁迫的作用元件。启动子活性分析表明,ZjNAC3的启动子可驱动GUS基因在拟南芥中表达,在转基因拟南芥中能够检测到GUS活性。ABA、Me JA、ETH、Na Cl和Mannitol处理可以抑制启动子活性,降低GUS基因的表达水平;SA处理能够增强启动子活性,诱导GUS基因的表达。4、将ZjNAC3转化酵母YPH500菌株,盐胁迫下ZjNAC3基因对酵母菌株生长具有负调控作用。同时对转基因植株的耐盐性分析,盐处理后转基因植株中的可溶性糖含量、叶绿素含量均显著低于WT,丙二醛含量和细胞膜透性显著高于WT,At NHX1基因的表达水平显著低于WT,表明转ZjNAC3基因的拟南芥植株具有盐敏感性。这可能与ZjNAC3基因参与盐胁迫调控途径有关,包括降低渗透调节能力、加深细胞受损程度以及削弱将Na~+隔离到液泡的能力,进而导致转基因拟南芥植株的盐敏感性表型。本研究探究了ZjNAC3基因及其启动子的基本特征,探索了其在盐胁迫下的调控情况和对拟南芥植株抗盐性的影响,并为进一步了解结缕草NAC基因的调控机理奠定了基础。