盘锦红海滩细菌多样性及1株产碱性蛋白酶菌株的研究

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盘锦红海滩是具独特魅力的湿地资源,独特的生态环境特征使其成为特殊微生物生存的大本营,是筛选功能性菌株的天然宝地。研究盘锦红海滩微生物多样性并对其进行分离鉴定和功能分析,对于发现微生物新种属,了解该土壤环境微生物资源、进化,探索微生物与环境间互作机制具有重要意义。本研究利用高通量测序技术分析盘锦红海滩细菌多样性,分离嗜盐、嗜碱细菌,筛选高产碱性蛋白酶菌株,探究其酶学特性。主要研究结果如下:1.利用高通量测序技术对5个采样点的盘锦红海滩15个土壤样品进行测序,结果表明盘锦红海滩的细菌群落分属于9个门,其中变形菌门(proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidets)为优势菌,分别占45.24%和21.90%;而其他7个门占比为32.86%,分别为厚壁菌门(Firmicutes)8.75%,绿弯菌门(Chloroflexi)6.92%,放线菌门(Actinobacteria)4.32%,芽单胞菌门(gemmationadetes)3.09%,酸杆菌门(Acidobacteria)2.48%,浮霉菌门(planctomycetes)1.63%,绿菌门(ignavibacteria)1.05%,其他菌门4.62%。2.利用稀释涂布和划线法分离得到80株嗜盐、嗜碱细菌,研究盘锦红海滩可培养微生物的种群构成,结果表明可培养的80株细菌分属于7门10属,其中芽孢杆菌属为优势菌属,占66.25%。3.从可培养的80株细菌中进一步筛选得到1株高产碱性蛋白酶菌株HHT597,经分子生物学鉴定为Bacillus altitudinis。该菌株生长的最适pH8.5,最适生长NaCl浓度范围较广(1-3%),嗜碱、嗜盐菌;该菌株可在碱性条件下产生碱性蛋白酶,酶活可达到47.24U/mL。4.HHT597菌株所产生的碱性蛋白酶在60℃高温的时候仍具有良好的稳定性,在NaCl浓度为5%较高的条件下仍具有活性,对于4种底物均具有可分解其蛋白质的特性,具有潜在的应用价值。
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