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背景近些年来,酒精性肝病(ALD)是威胁人类健康的主要肝病,占全球死亡率的0.9%。同时,乙型肝炎病毒(HBV)感染及其相关并发症对全球公共健康构成重大威胁。病毒感染和酒精摄入是原发性肝癌的两大病因,而乙型病毒和酒精相互协同作用对人群的影响更为严重,但是这些人群的代谢变化尚不清楚。对其代谢产物进行定性分析,寻找医学生物标志物和最显著的差异代谢途径,可用于疾病机制研究、药物靶点发现和癌症风险评估。方法本研究通过建立一种新的乙型肝炎病毒感染联合酒精肝小鼠模型,我们收集小鼠的肝组织匀浆,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOFMS)技术,对肝脏代谢谱和生物标志物进行筛选。结果鉴定了小鼠模型中涉及的差异代谢物,包括甘氨酸、L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-焦谷氨酸、一甲基戊酸、丙酮醛、N-乙酰-L-丙氨酸。经生物标志物分析,焦谷氨酸是酒精联合HBV组与酒精组之间的最显著的差异代谢物。此外,经HBV或酒精处理后,组间的主成分分析提示分离效果良好。代谢途径分析表明,这些差异代谢产物参与了7种代谢途径:谷胱甘肽(γ-谷氨酰-l-胱氨酰甘氨酸,GSH)代谢;氮代谢;核黄素代谢;缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成代谢;甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢;花生四烯酸代谢;D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢。从代谢组学的观点来看,谷胱甘肽代谢和维生素C是最重要的影响途径。结论所鉴定的焦谷氨酸可作为区分酒精组和酒精联合乙肝病毒携带者组的重要生物标志物。酒精组和酒精联合乙肝病毒携带者组在7种代谢途径中,谷胱甘肽代谢和维生素C代谢是显著差异代谢。目的观察不同浓度酒精与人的外周血T淋巴细胞体外共培养时,在不同时间点对T细胞亚群数量、活化功能及凋亡的影响。方法从健康供血者外周血通过密度离心分离出单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),PBMC与植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA)和不同浓度的酒精共同培养,分别共培养12小时,18小时,36小时,48小时后,采用流式细胞术检测各组淋巴细胞活化以及凋亡情况。同时,我们建立了酒精肝小鼠模型,取其脾脏制得单细胞悬液,进行流式细胞分析,对比分析在酒精作用下体内外的检测结果。结果1)PBMC与不同浓度酒精共培养12小时后,在3%和5%的酒精共培养下T淋巴细胞的数量在12小时内无明显变化,但是与空白对照相比PHA组CD8+T细胞出现活化,而且5%酒精可以抑制CD8+T细胞的活化(P<0.05)。2)PBMC与不同浓度酒精共培养18小时,酒精加PHA组与单纯PHA组相比降低了淋巴细胞的数量(P<0.05),而且随着酒精浓度增加淋巴细胞数量降的越明显(P<0.05),而且PHA刺激T细胞活化减弱。3)PBMC与不同浓度酒精共培养36小时,酒精加PHA组与仅有PHA组相比淋巴细胞的数量降低更显著(P<0.05)。4)PBMC与酒精共培养48小时,与单纯的PHA组相比酒精加PHA组的淋巴细胞几乎消失。5)凋亡流式结果显示,PBMC与酒精共培养的时间延长,CD3+T淋巴细胞凋亡比例升高,伴随着酒精浓度增加CD3+T淋巴细胞凋亡比例也同时增加。6)与对照组小鼠相比,ALD小鼠模型脾脏CD3+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD8CD69比例降低(p<0.05)。结论在3%酒精和5%酒精与人的外周血T淋巴细胞体外共培养时,酒精可以抑制PHA活化外周血T淋巴细胞;而且随着酒精浓度的增加,酒精可以降低T淋巴细胞及其亚群的细胞数量,酒精造成淋巴细胞数量减少的原因之一是酒精明显促进T淋巴细胞及其亚群凋亡,并随着酒精浓度增加T淋巴细胞及其亚群凋亡越明显。