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附红细胞体病（Eperythrozoonosis）是由附红细胞体（Eperythrozoon）寄生于红细胞表面、血浆及骨髓内的一种以贫血、黄疸、发热为主要临床特征的人兽共患病。该病对猪的危害尤为严重，给养猪业带来了巨大的经济损失。国内外针对该病已建立各种血清学诊断方法，但至今仍无商品化的试剂盒应用于该病的诊断，给该病的快速检测带来了一定困难。 本研究对猪附红细胞体进行了体外培养，将制备的抗原经 Sephadex G-200柱层析、SDS-PAGE电泳及Western-blot检测，获得了分子量为58kD和29kD的特异性抗原。在获得的抗原中分别加入 PMSF和 Protease inhibitor cocktail两种蛋白酶抑制剂，在4℃、20℃及37℃等不同条件下处理，通过定期测定抗原蛋白浓度和SDS-PAGE电泳，以此比较两种蛋白酶抑制剂对抗原的保护作用。结果证实，添加Protease inhibitor cocktail蛋白酶抑制剂的抗原在4℃下可保存3个月以上。 以纯化后保存的猪附红细胞体特异性抗原作为包被抗原，在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上进行了各反应参数的优化，确定了各参数的最适反应条件，并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被浓度为30μg/mL，被检血清稀释度为1∶100，酶标二抗的最适工作浓度为1∶4000，底物TMB最适反应条件为室温15分钟。检测血清的判定标准为OD450nm值≥0.13定为阳性反应，OD450nm值≤0.11定为阴性反应，0.11-0.13之间定为疑似反应。该试剂盒不与猪大肠杆菌、猪弓形虫、猪瘟等阳性血清发生交叉反应，具有较好的特异性；在不同时间对阴阳性样品重复测8次，阴阳性血清的OD450nm值变异系数均未超过10％，说明该试剂盒具有良好的重复性。 通过对组装试剂盒中各组分的稳定性和保存时间的测定结果证实，该试剂盒的保质期暂定为6个月。应用保存6个月的试剂盒与优化的间接ELISA对随机选取的的60份猪血清样本进行检测，阳性符合率达100%，说明该试剂盒具有较好的稳定性。本研究为国内猪附红细胞体病的快速诊断提供了一种新的有效途径，为试剂盒的进一步商品化奠定了基础。