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牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的非结构蛋白NS3对其他非结构蛋白的合成、病毒复制及促进宿主细胞凋亡过程中起着重要作用。BVDV开放阅读框的翻译依赖于上游非翻译区(5’untranslated region,5’UTR)的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)。BVDV NS3可能通过调节内部核糖体进入位点(IRES)介导的病毒的翻译来参与、影响BVDV病毒的复制周期。在BVDV病毒感染增殖过程中,NS3蛋白可被宿主体内的CD4+T细胞识别,从而诱导机体产生针对NS3蛋白的抗体。本论文通过DNA-star分析预测了NS3蛋白的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位,依据NCBI数据库中NS3蛋白的核苷酸序列,构建了 NS3原核表达载体pET-28a-his-NS3,然后与感染BVDV的阳性血清反应,证明了 NS3具有抗原性。这为建立针对BVDV疾病的快速免疫检测方法和疫苗研制提供了依据。同时,构建真核表达载体pEGFPC2-NS3和以BVDV IRES作为顺式作用元件的双报告载体pcDNA3.1-CAT-IRES-GFP,通过Western-blot分析发现NS3具有下调IRES启动的GFP蛋白的表达水平,而且随着NS3表达量的增加,IRES启动的GFP蛋白的表达量逐渐减少,说明这种负调节作用呈剂量依赖性。为了进一步确定NS3与IRES结合的区域,构建了IRES的荧光素酶报告载体pGL6-D及分段表达的荧光素酶报告载体pGL6-A、pGL6-B、pGL6-C,经双荧光素酶报告实验以及Western-blot结果,分析表明NS3对IRES的每个功能结构域介导的翻译水平都具有下调的作用,并且这种下调作用随着NS3表达量的增加,可导致IRES以及IRES分段结构域所介导的荧光素酶的活性逐渐降低。表明这种负调控作用呈剂量依赖性。总之,本研究说明了 IRES的每个结构域对于其自身介导的翻译的调控是必需的,并且,保持IRES结构的完整性对于IRES自身介导的病毒翻译具有重要意义。