水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus)。RDV的全基因组含有12条双链RNA,编码的蛋白可以分为结构蛋白和非结构蛋白。该病害在我国的云南、海南和福建等南方稻区普遍发生,在大爆发年份可造成水稻严重减产或绝收。本研究首先通过Gateway系统对非结构蛋白Pns6和结构蛋白P8进行原核表达,获得表达载体pDEST17-Pns6和pDEST17-P8,将表达载体转化E.coli Rosetta菌株,经IPTG诱导表达获得含HIS标签的融合蛋白,以诱导表达的目的蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果表明,Western blot检测制备的Pns6和P8抗体可特异性检测RDV,间接ELISA测定Pns6和P8抗体的效价均约为6400倍,并建立了可靠、灵敏、特异的Dot-blot ELISA方法检测RDV。以上研究表明,RDV非结构蛋白和结构蛋白抗体均可应用于该病毒在田间的大规模调查和检测。其次,通过建立病毒侵染水稻原生质体的侵染体系,并利用荧光定量技术、免疫荧光技术、western blot以及电镜技术来研究病毒在水稻原生质体中的复制和表达。(1)荧光定量实验结果表明,病毒侵染水稻原生质体后,在24-36 h达到首次复制高峰,S6、S12基因在24h时表达量达到最高,S8、S10、S11基因在36h时表达量达到最高。(2)免疫荧光实验结果表明,病毒侵染原生质体48 h后,Pns6蛋白在细胞质中可以形成类似于病毒原质(viroplasm)的点状内含体。说明了在植物寄主中Pns6也可能是viroplasm的组分。与此同时,外壳蛋白P8在病毒侵染48 h后,在viroplasm中进行了大量的复制,并有向细胞外运动的趋势。(3)westem blot实验结果表明,外壳蛋白P8在原生质体中的表达量比Pns6低且最大值出现的时间较晚。证明了病毒在侵染寄主细胞后,首先通过Pns6参与合成viroplasm,然后再进行病毒粒子的组装和释放。(4)电镜切片实验结果表明,病毒在水稻原生质体中形成内含体状的结构,并且在内含体里面可以看到类似于病毒粒子的双层衣壳结构。