人染色体3p14-24区域的显微切割及其DNA的分离和鉴定

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:RRR6670
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为了对食管上皮细胞染色体3p14-24区域可能存在的抑癌基因进行精细定位,本论文综述中分析了目前用于基因定位的染色体显带及RFLP(restriction fragment length polymorphism)等方法的不足,提出了筛选缺失基因的定位策略,将包括抑癌基因在内的一些肿瘤中缺失的基因,定位到一个较小的区域内,分析这一区域的DNA组成,能较方便地得到位于这一区域内的目的基因。本策略的实施,需要有3p14-24区域特异的DNA文库;显微切削染色体方法是获得这类文库的较好途径。论文在实验研究方面,首先建立了显微切割染色体技术,研究了两种扩增未知序列的超微量DNA的PCR(polymerase chain reaction)方法,即单引物填平连接PCR和低严谨复性PCR方法。对正常人中期染色体3p14-24区域进行显微切割和PCR扩增,所得DNA用染色体原位杂交的方法,进行定位,证明来源于3p14-24区域,肯定了所建立的显微切割染色体技术及PCR方法的精确性。以3p14-24区域DNA的PCR产物为探针,在人胎儿食管粘膜DNA文库中进行筛选,通过对一万个克隆的集落原位杂交,得到65个阳性克隆。用快速提取噬菌体DNA方法,提取10个阳性克隆的DNA,Bam HI酶解,插入片段大小均在19-21kb范围内;其中3个克隆的插入片段内部有Bam HI酶切位点,将此克隆进行染色体定位,证实位于3p。 本论文还讨论了显微切割染色体技术,在人类基因组测序和作图计划(human genome project)及染色体涂染(chromosome painting)等方面的应用。
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