干扰EphA3的慢病毒lentivirus-1504的构建及其对肝癌细胞7402的抑制作用研究

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目的:构建携带干扰癌基因EphA3的小干扰RNA慢病毒载体,并研究其对肝癌细胞7402的生长和迁徙的影响。  方法:构建携带EphA3小干扰RNA的慢病毒载体质粒并将其与外源EphA3表达质粒共转染至人胚肾细胞293T中,Western印迹检测其干扰EphA3蛋白表达的效果。将pSIH-H1-ShRNA-1504及空载体分别与3种包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒lentivirus-1504及对照慢病毒。将所获慢病毒分别感染肝癌细胞7402,并加入 puromycin(嘌呤霉素)筛选,1周后将细胞收集。Western印迹检测 EphA3蛋白的表达水平,然后分别应用MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验以及划痕实验检测敲低EphA3对肝癌细胞增殖能力、存活能力,恶性程度和迁移能力的影响。  结果:lentivirus-1504抑制了7402细胞EphA3的表达,敲低EphA3后抑制了7402细胞的增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力。  结论:慢病毒lentivirus-1504能够明显抑制肝癌细胞7402的生长能力、存活能力、恶性程度和迁移能力,这提示EphA3可能是一个新的肝癌治疗的靶点。
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