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本文通过免疫BALB/c小鼠制备3株肠出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体，并以该抗体研制肠出血性大肠杆菌O157:H7免疫胶体金试纸条；以购买的鲍氏志贺氏菌单克隆抗体研制鲍氏志贺氏菌免疫胶体金试纸条；成功研制出联合检测肠出血性大肠杆菌O157:H7和鲍氏志贺氏菌免疫胶体金试纸条，并测定三种试纸条灵敏度、特异性及模拟带菌，验证试纸条的性能。结果如下：(1)将骨髓瘤细胞SP2/0与出血性大肠杆菌O157:H7免疫小鼠得到的脾细胞融合，筛选得到3株稳定分泌抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3、E7、B9，抗体亚类测定试剂盒测得D3和B9亚类为IgG1，E7亚类为IgG2a，轻链亚型均为κ；通过SDS-PAGE测得D3、E7和B9重链均为45kd，轻链分别为26kd、30kd和25kd；(2)通过肠出血性大肠杆菌O157:H7试纸条性能测试筛选出抗体最优组合为：该试纸条检测抗体用D3，捕获抗体用E7，其中检测抗体偶联胶体金最佳pH通过单因素实验确定为7.5-8.0，最佳结合量为24μg/mL；(3)通过出血性大肠杆菌O157:H7试纸条灵敏度测定实验确定其灵敏度为106CFU/mL；通过出血性大肠杆菌O157:H7试纸条交叉反应实验确定其特异性良好，无交叉反应干扰试纸条结果判定；通过出血性大肠杆菌O157:H7试纸条模拟带菌实验表明，对市售面包、牛奶、果冻各25g（mL）均添加约200CFU出血性大肠杆菌O157:H7，增菌培养8h、10h、10h即可检出；(4)通过单因素实验确定鲍氏志贺氏菌检测抗体偶联胶体金最佳pH为7.5；通过单因素实验确定鲍氏志贺氏菌检测抗体偶联胶体金最佳结合量为21.6μg/mL；(5)通过鲍氏志贺氏菌试纸条灵敏度测定实验确定其灵敏度为106CFU/mL；通过鲍氏志贺氏菌试纸条交叉反应实验确定其特异性好，无交叉反应干扰试纸条结果判定；通过鲍氏志贺氏菌试纸条模拟带菌实验表明，对市售面包、牛奶、果冻各25g（mL）均添加约200CFU鲍氏志贺氏菌，增菌培养8h、10h、10h即可检出；(6)通过快速联合检测出血性大肠杆菌O157:H7和鲍氏志贺氏菌免疫胶体金试纸条灵敏度测定实验确定该试纸条对出血性大肠杆菌O157:H7、鲍氏志贺氏菌、两种菌混合液的检测灵敏度均为106CFU/mL；通过快速联合检测出血性大肠杆菌O157:H7和鲍氏志贺氏菌免疫胶体金试纸条交叉反应实验确定其特异性好，无交叉反应干扰试纸条结果判定；通过快速联合检测出血性大肠杆菌O157:H7和鲍氏志贺氏菌免疫胶体金试纸条模拟带菌实验表明，对市售面包、牛奶、果冻各25g（mL）均添加约200CFU出血性大肠杆菌O157:H7，增菌培养8h、10h、10h即可检出，对市售面包、牛奶、果冻各25g（mL）均添加约200CFU鲍氏志贺氏菌，增菌培养8h、10h、10h即可检出。研究表明，本实验自主制备的抗体性能良好，成功研发了出血性大肠杆菌O157:H7试纸条、鲍氏志贺氏菌试纸条，并且成功研发及创新了联合检测出血性大肠杆菌O157:H7和鲍氏志贺氏菌的多检免疫胶体金试纸条，单检及多检试纸条特异性、灵敏度达到国外同类产品，可在政府食源性致病菌监管部门、食品企业广泛推广运用。