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目的:观察前痛定方治疗经临床表型分类系统(UPOINT)分类属于T表型的Ⅲ型慢性前列腺炎(CP)的有效性、安全性。并通过复制Ⅲ型CP动物模型,观察前痛定方对动物模型脊髓小胶质细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的影响,进一步研究前痛定方干预Ⅲ型CP疼痛的作用机制和靶点所在。方法:临床研究:2015年1月至2016年1月于深圳市中医院男科门诊就诊、经UPOINT分类属于T表型的120例Ⅲ型CP疼痛患者按其就诊先后顺序,根据区组随机化方法分配到治疗组(G1,n=40)、对照1组(G2,n=40)、对照2组(G3,n=40),G1组口服前痛定方(组成:柴胡10g、白芍15g、枳实15g、甘草5g、川楝子15g、延胡索15g、橘核15g、乌药15g、桃仁5g、红花5g、车前子15g、黄柏10g),水煎服,临床根据患者病情变化辨证论治灵活化载,若气郁甚见胸胁胀痛,加香附20g,郁金20g以增强解郁止痛;若气郁蕴热见心胸烦热,加栀子10g,淡豆豉5g宣泄郁热;气虚见神疲气短,加黄芪30g,炒白术15g以健脾益气;若寒痛明显,橘核换成荔枝核30g,乌药重用30g,加干姜5g,口服2次/d,连续用药30天。G2组口服塞来昔布胶囊,200mg/每次,每日一次,连续用药30天。G3组口服塞来昔布胶囊+前痛定方,连续用药30天。治疗前、后对所有入选患者进行慢性前列腺炎症状指数(CPSI)、慢性前列腺炎中医辨证评分参考表评分并进行疗效评价:应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者前列腺液中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)、环氧化酶2(COX-2)水平,并记录研究过程中出现的所有不良反应情况。动物实验:80只6周龄雄性SPF级SD大鼠(150g左右)适应性饲养7天后,采取区组随机化法分为4组:正常组(A组,n=20)、假造模组(B组,n=20)、前痛定组(C组,n=20)、蒸馏水组(D组,n=20)。A组正常饲养;B组采用前列腺腹侧叶注射生理盐水0.1ml假造模,C组、D组前列腺腹侧叶注射弗氏完全佐剂(FCA)0.1ml造模CP。手术后第5天开始,A组、B组、D组蒸馏水1ml/100g灌胃;C组前痛定方溶液1ml/100g灌胃,每天一次。所有大鼠一周称量一次体重,并随之改变灌胃药量。分别于手术后第5天、第11天、第18天、34天,每组抓出5只,采用热辐射刺激仪(50W,12V)发出直径5mm光斑照射大鼠足底,测定大鼠反射潜伏期(TWL);脱臼处死后打开腹腔,取出大鼠肝、肾、前列腺;纵行剖开椎管,取出L5-S2段脊髓。预冷的无菌生理盐水漂洗去除血液后,肝、肾、前列腺左腹侧叶经10%中性福尔马林固定24小时,全自动脱水,石蜡包埋,组织切片,HE染色,镜检。前列腺右腹侧叶及L5-S2段脊髓剪碎,装入1.5ml无菌离心管,液氮速冻后-80℃保存。实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CP模型大鼠L5-S2段脊髓IBA-1 mRNA、p38MAPK mRNA的表达,Western Blot法检测L5-S2段脊髓p38MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(pp38MAPK)蛋白的表达;ELISA法检测CP模型大鼠脊髓、前列腺中P物质(SP)、TNF-α、COX-2 的水平。结果:临床研究:共有120名患者接受了本临床研究,G1组5例、G2组6例、G3组5例患者因中途自行接受其他治疗而退出,其余104名均顺利完成试验。研究前,三组间年龄构成、病程、CPSI总分、疼痛症状评分、慢性前列腺炎中医辨证评分参考表评分、TNF-α、IL-10、COX-2水平经比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)认为三组间基线特征均衡性良好,具有可比性。研究后,组内比较,三组CPSI、疼痛症状评分、慢性前列腺炎中医辨证评分参考表评分、TNF-α、COX-2水平均较研究前降低,IL-10水平较研究前升高,其差异经比较,具有统计学意义(P<0.05)。组间比较,①G1、G3组的CPSI、疼痛症状评分、慢性前列腺炎中医辨证评分参考表评分、TNF-α、COX-2水平均较G2组降低,经比较,其差异具有统计学意义(P<0.05),IL-10水平较G2组升高,经比较,其差异具有统计学意义(P<0.05)。②G1组与G3组所有指标经比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。③G1组(n=40)总有效率87.50%(治愈5例,显效21例,有效11例,无效3例);G2组(n=40)总有效率62.50%(治愈3例,显效7例,有效15例,无效15例);G3组(n=40)总有效率95.00%(治愈6例,显效22例,有效10例,无效2例),经比较,其差异具有统计学意义(P<0.05),G1、G3组临床疗效明显优于G2组,④研究过程中,G1组出现腹胀2例,腹泻1例,轻度瘙痒1例,总不良情况发生率10.00%;G2组出现胃脘不适3例,头晕1例,轻度瘙痒1例,总不良情况发生率12.50%;G3组出现腹胀1例,胃脘不适4例,头晕1例,总不良情况发生率15.00%,未发现其他重大不良事件,所有发生不良情况的患者未经特殊处理,在坚持用药一段时间后,不良情况均消失。三组不良反应情况发生率经比较,卡方值=0.4627,P=0.7935>0.05,其差异不具有统计学意义。动物实验:所有SD大鼠均顺利完成研究,①解剖过程中肉眼观察各组肝脏、肾脏大体形态正常,包膜完整,色泽鲜红,均未见明显坏死、出血点、肿大等,亦未扪及质地有明显的变化。光镜下见所有组别肝脏及肾脏大致正常。②TWL值:A组、B组之间所有时间段TWL值,经比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。手术后第5天,C组、D组TWL值较A、B组明显缩短,其差异经比较,具有统计学意义(P<0.05)。C组手术后第11天、第18天TWL值逐渐延长,与手术后第5天相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05);手术后第34天时,TWL值与A、B组比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。D组手术后第11天、第18天、第34天TWL值稍有上升,与手术后第5天相比,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。③直接观察:A组、B组见所有大鼠前列腺腹侧叶红润有光泽,未见明显水肿、充血以及坏死等。C组,手术后第5天,可见所有大鼠前列腺腹侧叶水肿、充血明显,未见局部坏死;手术后第11天、第18天,大鼠前列腺腹侧叶水肿、充血较第5天各有所减轻,未见局部坏死;手术后第34天,已未见明显水肿、充血以及坏死等。D组,手术后第5天、第11天可见所有大鼠前列腺腹侧叶水肿、充血明显,未见局部坏死;手术后第18天,大鼠前列腺腹侧叶水肿、充血较前各有所减轻,未见局部坏死;手术后低34天,已未见明显水肿、充血以及坏死等。④光镜下观察:A组、B组见所有大鼠前列腺组织结构正常,腺体分布排列正常,腺腔内多有粉红色分泌物,间质内无水肿,无明显淋巴细胞浸润。C组手术后第5天,前列腺腺体结构破坏,腺腔扩张,多数腺腔内可见组织细胞、炎细胞(以中性粒细胞为主)和变性坏死组织等,间质水肿,小血管扩张充血,间质及腺体内灶状淋巴细胞浸润或淋巴细胞浸润呈片状分布;手术后第11天、第18天,大鼠前列腺组织炎症较第5天明显消退,间质内偶见淋巴细胞浸润或淋巴细胞浸润呈片状分布;手术后第34天,大鼠前列腺组织炎症明显消退,腺上皮细胞轻度增生,排列较整齐,腔内有少量粉红色分泌物,间质有少量炎症细胞散在分布。D组手术后第5天、第11天,前列腺腺体结构破坏,腺腔扩张,多数腺腔内可见组织细胞、炎细胞(以中性粒细胞为主)和变性坏死组织等,炎细胞以中性粒细胞为主,间质水肿,小血管扩张充血,间质及腺体内灶状淋巴细胞浸润或淋巴细胞浸润呈片状分布;手术后第18天,大鼠前列腺组织炎症较第5天有所消退,间质内偶见淋巴细胞浸润或淋巴细胞浸润呈片状分布;手术后第34天,大鼠前列腺组织炎症明显消退,腺上皮细胞轻度增生,排列较整齐,腔内有少量粉红色分泌物,间质有少量炎症细胞散在分布。⑤A组、B组之间所有时间段L5-S2段脊髓内IBA-1mRNA、p38MAPK mRNA、pp38MAPK蛋白的表达水平、L5-S2段脊髓、前列腺内SP、TNF-α、COX-2的水平经比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。⑥所有组别、所有时间段内L5-S2段脊髓内p38MAPK蛋白的表达水平,经比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。⑦手术后第5天,C组、D组L5-S2段脊髓内IBA-1 mRNA、p38MAPK mRNA、pp38MAPK蛋白的表达水平增加;L5-S2段脊髓、前列腺内SP、TNF-α、COX-2的水平升高,与A、B组比较,其差异具有统计学意义(P<0.05)。⑧C组手术后第11天、第18天L5-S2段脊髓内IBA-1mRNA、p38MAPK mRNA、pp38MAPK蛋白的表达水平降低,L5-S2段脊髓、前列腺内SP、TNF-α、COX-2的水平降低,与手术后第5天相比较,其差异经具有统计学意义(P<0.05);手术后第34天时,L5-S2段脊髓内IBA-1mRNA、p38MAPK mRNA、pp38MAPK蛋白的表达水平、L5-S2段脊髓、前列腺内SP、TNF-α、COX-2的水平,与A、B组比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。⑨D组手术后第11天、第18天、第34天L5-S2段脊髓、前列腺内 IBA-1mRNA、p38MAPK mRNA、pp38MAPK蛋白、SP、TNF-α、COX-2 的表达水平,与手术后第 5 天相比,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。D组手术后第34天L5-S2段脊髓内SP、TNF-α、COX-2的水平,与A、B组比较,其差异其差异具有统计学意义(P<0.05),与手术后第5天相比,其差异不具有统计学意义(P>0.05);D组手术后第34天前列腺内SP、TNF-α的水平,与A、B组比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:临床研究表明:前痛定方能显著降低经UPOINT分类属于T表型的Ⅲ型CP疼痛患者的CPSI、疼痛症状评分、慢性前列腺炎中医辨证评分,改善各种临床症状,提高患者生活质量,其作用机理可能与调控疼痛反应过程中各种炎症细胞因子的水平有关,其安全性良好。动物实验表明:①前列腺腹侧叶注射FCA复制CP模型成功。②CP模型大鼠对于前列腺炎症具有自愈性。③前列腺炎疼痛的持续和泛化跟支配前列腺的L5-S2段脊髓发生继发病变、p38MAPK信号传导通路激活、小胶质细胞异常活化有关。④前痛定方对CP模型大鼠有明显的抗炎、止痛效果。⑤前痛定方可以通过降低CP模型大鼠前列腺内部炎性细胞因子比如SP、TNF-α、C0X-2的水平,间接地减弱L5-S2段脊髓内p38MAPK信号转导通路的信号转导、抑制小角质细胞的活化,从而降低L5-S2段脊髓内SP、TNF-α、COX-2等炎性细胞因子的水平,发挥抗炎、止痛作用。⑥前痛定方还可以直接抑制脊髓小胶质细胞内p38MAPK信号通路的传导和小胶质细胞的活化,进一步地降低L5-S2段脊髓内SP、TNF-α、COX-2等炎性细胞因子的水平,继而发挥抗炎止痛作用。