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传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的急性、高度接触性传染病,给世界范围内养鸡业带来巨大经济损失。本研究制备了血凝抑制(HI)试验抗原,建立了检测IBV抗体的HI试验方法；对分离的IBV流行毒株(LH株)进行了全面鉴定,并研制了IB-新城疫(ND)-传染性法氏囊病(IBD)-减蛋综合症(EDS)-禽流感(AI)五联灭活疫苗。1检测IBV抗体的HI试验抗原制备本研究比较了三种浓缩IBV方法(超速离心法、PEG沉淀法和PEG透析法)和三种酶(A型产气荚膜梭菌培养滤液、Ⅰ型卵磷脂酶C和神经氨酸酶)对制备HI试验抗原的影响。最后确定最佳方法为：将IBV(M41株)接种于10日龄SPF鸡胚,37℃孵化36h,收获尿囊液经4000g离心30min,将上清再次以25000g离心70min。浓缩的病毒液加入终浓度为3U/mL的PLC1,37℃孵育2h,制备的HI试验抗原具有较高的特异性,建立的HI试验方法可以用于检测IBV HI抗体。2IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗的研制本研究对IBV(LH株)种毒进行了鉴定,将毒株在鸡胚中连续传10代,测得P1、P5和P10代的病毒含量都≥106.5EID50/0.1mL,说明此毒株稳定。IBV(LH株)种毒无细菌、霉菌、支原体和其他外源病毒污染。使用H120弱毒疫苗做基础免疫,3周后再用本毒株所制灭活疫苗免疫,二免IBV HI抗体效价几何平均值是首免HI抗体效价几何平均值的3倍以上,IBV(LH株)具有良好的免疫原性。用NDV(LaSota株),IBV(LH株),IBDV(NF8株),EDSV(AV127株)和H9亚型AIV(F株)接种SPF鸡胚或非免疫鸭胚,收获病毒液,经0.1%甲醛灭活后制得抗原,按照一定生产工艺方法乳化,制成IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗。用五联灭活疫苗免疫鸡只,免疫3周后NDV HI抗体效价几何平均值达到6.5log2,IBV HI抗体效价几何平均值达到7.1log2,IBDV抗体效价几何平均值达到583(大于等于391为阳性)。免疫4周后,免疫鸡只的H9亚型AIV HI抗体效价几何平均值达到7.510g2,EDSV HI抗体几何平均值可以达到8.8log2。攻毒后,免疫鸡可以抵抗IBV(LH株)、ND(F48E8株)和H9亚型AIV(F株)攻击,获得完全保护。五联灭活疫苗对IB、ND、IBD、EDS和H9亚型AI的免疫保护期至少12周。