【摘 要】
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采用牛瘟病毒的重组N蛋白免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选,获得了可稳定分泌抗牛瘟病毒N蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2A6-E10,经
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采用牛瘟病毒的重组N蛋白免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选,获得了可稳定分泌抗牛瘟病毒N蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2A6-E10,经鉴定,2A6-E10杂交瘤细胞分泌的单抗为IgG1亚类,杂交瘤细胞的染色体为98条,细胞培养上清与腹水的抗体效价可达到1:2560,1:4096×10<4>,该抗体在间接法ELISA中与PPRV不发生交叉反应.以2A6-E10单抗为基础建立了RPV的竞争法ELISA(C-ELISA)程序.经对OIE牛瘟参考实验室提供的牛瘟参考血清及305份田间牛血清样品的检测证实该程序可达到与OIE提供的RPV竞争法ELISA试剂盒同样的敏感性和特异性.参照已发表的牛瘟病毒F基因序列,设计合成了一对可扩增F基因436bp的引物,用该引物对中村Ⅲ系牛瘟兔化病毒Vero细胞毒、兔血毒及组织毒进行RT-PCR扩增,获得了与预期一致的RT-PCR产物,建立的RT-PCR程序对小反刍兽疫病毒(PPRV)、Vero细胞对照及正常兔组织样品不发生交叉反应;对牛瘟病毒的最低检测限量可达到到0.3ng cDNA.
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