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纳米银(nAg)优异的物理化学性质和抗菌性能使其广泛地应用于医疗、食品和生物等行业中。近年来随着商业化纳米银产品种类和产量的显著增加,nAg释放到环境并进入人体的环境与健康风险不断加大,其安全性引起了人们广泛的关注。许多体内研究表明肝脏是纳米银主要累积器官之一。为研究nAg对肝细胞的毒性效应和作用机制,我们选择20 nm和100 nm的纳米银颗粒(nAg-20和nAg-100)和Ag+对肝癌细胞HepG2和肝正常细胞LO2进行暴露,以线粒体为主要研究对象,研究了不同粒径nAg和Ag+对肝细胞的毒性效应差异及作用机理。 我们研究了细胞活性、细胞膜完整性、细胞凋亡、ROS水平与nAg暴露剂量效应关系;通过ICP-MS检测了细胞摄入总银水平,采用高分辨TEM观察了两种粒径nAg在细胞中的分布状况;最后,以线粒体为研究重点,考察了nAg对细胞线粒体超氧化物水平、线粒体膜电势、线粒体膜孔通透性、细胞色素C释放量及促凋亡酶caspase3/7活性的影响。研究表明,2μg/mL nAg和1μg/mLAg+是亚毒性剂量,此剂量可以诱导细胞出现凋亡,但细胞活性仍维持在80%以上;通过对细胞膜完整性检测发现,只有nAg-100和Ag+对HepG2细胞的膜完整性产生明显损伤,表明细胞膜损伤只是nAg产生细胞毒性效应的一部分;对细胞摄入nAg和Ag+量检测结果表明两种细胞摄入nAg-100的量基本相同,但对于nAg-20和Ag+,HepG2细胞摄入量大于LO2细胞,同时TEM观察细胞切片也证实了细胞摄入的nAg以粒子的形式存在;对线粒体状态研究表明,nAg和Ag+引起线粒体超氧化物上升并降低线粒体膜电势,但只有nAg颗粒可以引起细胞线粒体膜孔打开,释放出细胞色素C,激活下游凋亡酶caspase3/7活性。总之,我们研究的结果表明nAg可以通过作用于线粒体诱导肝细胞毒性效应。在此作用过程中,nAg主要以粒子形式发挥效应,但其作用机制仍有待进一步研究。