论文部分内容阅读
自从大肠杆菌第一次被人们发现以来,致病大肠杆菌在全球范围内给养殖业造成了严重的损失。在大肠杆菌众多的血清型中,尤以E.coli K88、E.coli K99最为广泛,到目前为止尚无有效的措施和药物预防和控制。噬菌体作为一种细菌病毒,能对宿主菌进行特异裂解,这一特性使得研究者找到了治疗细菌性问题的新思路和新方法。近来相关研究表明：治疗性噬菌体制剂拥有使用剂量小、疗效好、无毒副作用、疗效快等抗生素无法比拟的优点。美国FDA在2007年批准上市的大肠杆菌0157：H7噬菌体制剂,标志着噬菌体制剂研究的进入了临床研究的新阶段。本试验采用双层琼脂平板法来进行噬菌体的分离和纯化,并且以E.coli K88为宿主菌,分离到1株烈性噬菌体,将其命名为Bp8A0811；以E.coli K99为宿主菌分离得到2株烈性噬菌体,分别将其命名为Bp9B1226、Bp9C1213。其中2株E.coli K99噬菌体的效价较高,可以达到1010pfu/ml,Bp8A0811的效价与Bp9B1226、Bp9C1213的效价为109pfu/ml。刚开始分离得到的噬菌斑较小,经进一步的纯化后,其噬菌斑明显增大,对宿主菌的裂解能力增强。通过3株噬菌体对E.coli K88、E.coli K99及鸡大肠杆菌的裂解谱和裂解曲线的测定,发现Bp8A0811基本不能裂解E.coli K99、鸡大肠杆菌,其对这两种细菌的裂解曲线与对照组曲线相差不大。Bp9B1226、Bp9C1213对E.coli K99的裂解曲线除了在刚开始的时候有一点上升,很快就会下降；Bp9B1226、Bp9C1213对E.coli K88的裂解曲线在上升段的时间比E.coli K99上升段的时间长,其裂解E.coli K88的能力较Bp8A0811弱。3株噬菌体都不能裂解鸡大肠杆菌,且噬菌体与细菌的混合液的OD600值一直呈上升的趋势。通过对Bp9B1226噬菌体生物学特性研究发现,其热稳定性较好,在60℃水浴作用30min仍有较高的效价；但其对温度耐受性不高,当水浴时间延长至60min后,其效价下降较多。Bp9B1226噬菌体在pH6-9范围内效价较稳定,在pH小于5和pH大于10时,其效价明显下降。本实验研究探讨了4种不同的保存方法,发现噬菌体在4℃和-80℃保存的效果较好,其效价在6个月内仅下降2-3个数量级,这两种保存方法适合用于6个月内的保存；常温和-20℃都不能长期保存,超过3个月的保存时间,效价受到较大的影响。