论文部分内容阅读
随着规模化养殖业的发展，畜禽传染病已成为对养殖业危害最严重的一类疾病，它不仅能造成大批畜禽死亡和畜产品的损失，影响人们生活和对外贸易，而且某些人畜共患的传染病还能给人们健康带来严重成胁。尤其是现代化的养殖业，畜禽饲养高度集中，调运移动频繁，更易受到传染病的侵袭。因此，迫切需要建立一种早期诊断方法进行快速诊断以控制病情，淘汰感染畜禽，减少损失，降低危害。 IgM是机体初次体液免疫反应中最早产生的免疫球蛋白，因此在抗感染免疫的早期起着十分重要的作用，可通过检测IgM抗体进行疫病的血清学早期诊断。本试验建立的抗IgMμ链单抗诊断方法对于研究这些疾病的免疫特性、诊断和防制技术均有重要意义。本研究以原核表达的IgMμ蛋白，采用长程免疫法免疫BALB／c小鼠，取四免后的小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞在PEG4000作用下进行细胞融合，融合率均达90％以上，将重组杆状病毒表达的鸡、猪、牛真核IgMμ蛋白同时作为包被抗原建立间接ELISA，用于检测筛选杂交瘤细胞上清中的抗体，三种ELISA检测均为阳性的细胞克隆经有限稀释法进行三次亚克隆，获得一株能稳定分泌抗鸡IgMμ单抗的杂交瘤细胞株，命名为1H2。将此株杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代，仍能分泌高效价抗体，亚型鉴定为IgG1 κ型，腹水效价为1：1×106。间接ELISA和Western-blot检测显示，这株单抗具有良好的反应原性，能敏感、特异地检测出鸡、猪和牛血清中的IgM。 本研究所获得的抗IgMμ链单克隆抗体为鸡、猪和牛传染性疾病的早期快速诊断提供新且简便的途径，而且为进一步建立快速、敏感、特异的抗IgMμ链标记单抗诊断试剂盒奠定了基础。还可以用于检测组织部位中含有IgM的细胞以及对外周血中具有IgM表面抗原受体细胞进行定量，并且可以通过与B细胞膜表面抗原结合，从分子水平上研究B细胞抗原提呈特点，从而为显著降低疫苗接种剂量、提高机体免疫能力方面的探索提供新的实验手段。