云南撒坝猪大肠杆菌HPI主要结构基因及其致病性研究

来源 :云南农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhangtao870508
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为了探讨云南撒坝猪大肠杆菌HPI主要结构基因及其致病性关系,主要通过PCR扩增实验、菌落原位斑点杂交实验、摄铁实验、动物实验和耐药性实验等方法研究大肠杆菌的致病关系。首先对CVCC1565菌株进行PCR扩增检测得到阳性对照,再以44株优势血清型大肠杆菌菌株为材料,以PCR扩增和菌落原位斑点杂交方法检测高致病性毒力岛(HPI) irp2、irp1、 irp3、irp4和irp5基因,测序,各基因与GENBANK上的序列进行比对得出同源性均在95%以上,另外根据系统进化树的进化距离比较,得出实验菌株在遗传学上具有EIEC、UPEC、Y-pestis、EPEC的特点,蛋白预测结果表明了HPI中HMWP1蛋白条带的差异与糖基化位点有关,磷酸化位点参与细菌的能量代谢和生物氧化,使细菌能捕获铁离子来增强HPI的致病力;SDS-PAGE实验(浓度为0.2mmol/L2-2’-双吡啶)在缺铁的情况下得出10株大肠杆菌优势血清型HPI菌株具有HMWPs的表达;CAS固体培养基中菌株能产生橘黄色晕圈;β-内酰胺类抗生素药敏实验,得出对头孢哌酮、头孢唑啉比较敏感;动物致病性实验得出LD50为102.93μl,解剖病死小白鼠发现,肝脏充血,脾脏边缘呈暗紫色,十二指肠水肿等明显病变。病理组织学观察可见,肺脏毛细血管充血、出现肺气肿及肺泡间隔增宽,心肌纤维断裂、排列紊乱,肝细胞肿大、变性及肝窦出血,十二指肠上皮细胞变性坏死、肠绒毛脱落等。通过以上的这些实验结果表明:云南撒坝猪大肠杆菌HPI主要结构基因及其致病性关系存在着一定关系。
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