人巨细胞病毒是一种β-疱疹病毒,其在人群中具有较高的感染率,在普通人群中,均为隐性感染,无临床症状,但是在免疫力低下患者中,如艾滋病患者、器官移植患者等特殊人群,人巨细胞病毒往往会被激活,从而导致临床症状,比如视网膜炎、胸膜炎、发烧等。另外,人巨细胞病毒的隐性感染与胎儿致畸、结肠憩室炎、动脉硬化等密切相关。目前FDA批准的抗人巨细胞病毒药物较少,且由于这些药物具有肾毒性、造血抑制、病毒的抗药性、以及低生物利用度等缺点,严重的限制了临床的使用。所以,有必要继续寻找高效低毒的抗人巨细胞病毒药物。目的:冬虫夏草是一种名贵的中草药材,含有多种活性成份,比如,多糖、核苷、甘露糖等;具有多种生物活性,如提高免疫力、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖、清除自由基等。本研究拟探讨冬虫夏草用于抗人巨细胞病毒的可行性。方法:首先制备本研究所用的宿主细胞、人巨细胞病毒、以及冬虫夏草提取物;采用MTT法对提取物进行细胞毒性测试,确定药物对宿主细胞的无毒浓度;通过噬斑减少试验确定药物抗人巨细胞病毒活性,并确定其半数抑制量;通过免疫印迹以及对细胞活性的检测,确定其潜在的抗人巨细胞病毒靶位。结果:分离培养出了适于本研究用的宿主细胞-人包皮成纤维细胞;制备出高滴度人巨细胞病毒储备液(2.4×106PFU/ml);通过细胞毒性实验,发现当冬虫夏草水提物浓度≤0.5mg/ml时,对细胞代谢不产生影响;通过噬斑减少试验,发现冬虫夏草水提物可以有效抑制人巨细胞病毒的复制,其半数抑制量(IC50)为0.17mg/ml;采用免疫印迹分析病毒蛋白表达情况,发现冬虫夏草可以抑制IE2/UL84表达,削弱IE1表达;另外,冬虫夏草水提物可以抑制因人巨细胞病毒感染引起的细胞活性升高。结论:冬虫夏草可以有效抑制人巨细胞病毒的复制,具有较强的抗人巨细胞病毒活性。研究中发现,其可以抑制IE2/UL84的表达,以及削弱IE1的表达。这些提示冬虫夏草通过抑制这些蛋白的表达,从而达到抗人巨细胞病毒的活性。另外,其他研究表明,抑制人巨细胞病毒引起的细胞内生理反应,可以抑制人巨细胞病毒的复制,在本研究中发现,冬虫夏草可以抑制因人巨细胞病毒感染引起的细胞活性的改变,这提示,冬虫夏草可以通过抑制细胞活性的升高,而抑制人巨细胞病毒的复制,但具体机制仍然需要进一步研究,因为也有可能是由于抑制了IE2/UL84的表达所造成的。总之,以上研究为进一步从冬虫夏草中分离、鉴定有效的抗人巨细胞病毒药物,以及作用靶点研究,奠定了基础。