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甾体激素药物主要有肾上腺皮质激素、性激素、蛋白同化激素三大类,对机体起着非常重要的调节作用,在世界范围内其产量仅次于抗生素。以油脂工业副产物大豆油脚中蕴藏的植物甾醇为原料,通过微生物转化为关键甾体药物中间体,是甾体药物生产的优势途径。在实验室一株能有效以植物甾醇为底物转化生产雄甾-1,4-二烯.3,17-二酮(ADD)的菌株的基础上进行诱变筛选出一株转化植物甾醇单产ADD突变株,对其发酵特性进行研究,并对底物ADD的提取分离进行初步探索。
主要工作包括以下3个方面:
1、采用紫外诱变筛选得到转化植物甾醇单产ADD的突变株Mycobacteriumsp.uv-11,在其基础上进行紫外-亚硝基胍复合诱变的到一株稳定单产ADD的突变菌株Mycobacterium sp.uv-11-12,在甾醇添加量1%时,ADD浓度最高达到0.87g/L,生成率提高了约40%,而AD在发酵5天后几乎检测不到。
2、根据出发菌株培养条件进行优化最终确定产物最佳转化培养基(%):植物甾醇1.0,葡萄糖1.0,蛋白胨1.0,K2HPO40.3,MgSO40.02,MnCl25×10-5,卵磷脂0.4,pH7.0,10%的接种量,30℃,转速200 r/min下发酵7天,优化后产物ADD浓度最高达到1.44g/L,生成率为21.73%,比原培养基提高了72%。
3、确定了大孔树脂Amberlite xad-7粗提产物ADD工艺,粗样品中ADD含量为66.6%,几乎检测不到AD。