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第一部分:UrotensinⅡ对荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响 目的:观察移植瘤的体积和重量,研究UⅡ对荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响。 方法:将非小细胞肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型,待移植瘤平均直径达到4mm后随机分为四组:对照组、UⅡ组(40μg/kg)、DDP组(25mg/kg)、DDP+UⅡ组(DDP25mg/kg和UⅡ40μg/kg),每周给予相应的药物两次,连续给药7周。每周测量移植瘤体积,绘制各组裸鼠移植瘤生长曲线。实验结束后取出移植瘤称重。 结果:1.所有接种肺癌细胞系A549的裸鼠均成瘤。2.与对照组相比,UⅡ组裸鼠移植瘤生长曲线更加陡直,而DDP组裸鼠移植瘤生长曲线平缓;与DDP组相比,DDP+UⅡ组裸鼠移植瘤生长曲线较陡直。3.与对照组相比,UⅡ组裸鼠移植瘤重量显著增大(P<0.05),而DDP组裸鼠移植瘤重量显著减小(P<0.01);DDP+UⅡ组裸鼠移植瘤重量虽比DDP组移植瘤大,但两组移植瘤重量差别无统计学意义(P>0.05)。 结论:UⅡ能明显促进荷瘤裸鼠移植瘤的生长。 第二部分:UrotensinⅡ对肺癌炎症微环境的影响及机制 目的:观察UⅡ对肺癌组织中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润及炎症因子表达水平的影响及UⅡ对NF-κB活化的影响,初步探讨UⅡ对肺癌炎症微环境的影响及机制。 方法:1.免疫组织化学染色技术(IHC)检测肿瘤组织中CD68+TAMs浸润情况。2.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-6、TNF-α、MMP-9在肿瘤组织中的表达水平。3.Western blot法检测各组肿瘤组织中p-NF-κB和NF-κB的表达。 结果:1.IHC检测结果显示,CD68阳性染色呈棕黄色,主要表达于细胞浆中,与对照组相比,UⅡ组阳性染色明显增强,而对照组阳性染色明显减弱;而与DDP组相比,DDP+UⅡ组阳性染色较强。统计学分析显示,与对照组相比,UⅡ组CD68的积分光密度(IOD)值显著增高(P<0.01),DDP组则显著降低(P<0.01);与DDP组相比,DDP+UⅡ组IOD值明显增高(P<0.01)。2.ELISA检测结果显示,与对照组比较,UⅡ组IL-6、MMP-9和TNF-α的水平显著升高(P<0.05);而DDP组IL-6、MMP-9和TNF-α的表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。3.Western blot检测结果显示,各组间NF-κB的表达水平没有明显差异。但与对照组相比,UⅡ组p-NF-κB表达水平明显升高(P<0.05),DDP组p-NF-κB的表达水平则显著降低(P<0.01)。与DDP组相比,DDP+UⅡ组p-NF-κB的表达水平明显升高(P<0.01)。 结论:1.UⅡ可增加肺癌组织中浸润的TAMs的数量,诱导IL-6、TNF-α、MMP-9等炎性细胞因子的表达,提示UⅡ能够促进肺癌炎症微环境的形成。2。UⅡ能促进NF-κB的活化,这可能是其诱导下游炎症分子IL-6、TNF-α等的表达上调,促进肺癌进展的机制之一。