【摘 要】
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结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率都处于上升趋势。BRAF基因的突变在结直肠癌的发生和发展中起到重要作用。BRAFV600E突变基因的判断对结直肠癌预后及指导结直肠癌治疗具有重要意义。目前常用的检测BRAFV600E突变基因的方法有免疫组化和基因测序等方法,但都具有一定的局限性。为此,我们尝试探索找寻一种新的、快速的辅助临床病理诊断的检测结直肠癌中BRAFV600E突变基因的方法。近红外
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结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率都处于上升趋势。BRAF基因的突变在结直肠癌的发生和发展中起到重要作用。BRAFV600E突变基因的判断对结直肠癌预后及指导结直肠癌治疗具有重要意义。目前常用的检测BRAFV600E突变基因的方法有免疫组化和基因测序等方法,但都具有一定的局限性。为此,我们尝试探索找寻一种新的、快速的辅助临床病理诊断的检测结直肠癌中BRAFV600E突变基因的方法。近红外光（near infrared,NIR）是介于可见光和中红外光之间的电磁波,美国材料检测协会将近红外光谱区定义为波长780-2526nm的光谱区(波数约为1200-4000cm-1)。利用近红外漫反射光谱高特异性快速识别的特性,扫描结直肠癌组织常规石蜡切片,应用化学计量学技术对所测光谱进行处理分析,建立结直肠癌组织BRAFV600E突变基因判别模型,与目前常用的免疫组化检测BRAFV600E突变基因方法比较,初步探寻一种新的快速识别结直肠癌组织BRAFV600E突变基因的方法。方法1、选择经二代测序确定BRAF基因突变状态的58例结直肠癌组织标本,其中8例为突变型,50例为野生型。2、选取其中12例结直肠癌组织石蜡包埋切片（6例BRAF野生型,6例BRAF突变型）,用基于积分球的近红外光谱漫反射记录信号,采用判别分析法（discriminant analysis,DA）构建识别BRAFV600E突变基因模型。3、选取经二代测序明确BRAF基因突变状态的4例结直肠癌组织石蜡包埋切片（2例野生型,2例突变型）,验证BRAFV600E突变基因近红外光谱判别分析（DA）模型。4、扫描42例结直肠癌组织石蜡包埋切片,采用建立的BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型,预测BRAFV600E突变基因。5、用免疫组化法检测上述42例结直肠癌组织标本BRAFV600E突变基因蛋白表达,并与近红外光谱方法预测BRAFV600E突变基因结果及二代测序结果比较。结果采用12例（6例野生型和6例突变型）结直肠癌组织石蜡包埋切片建模,校正集正判率为100%。采用4例（2例野生型和2例突变型）结直肠癌组织石蜡包埋切片,验证BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型判断BRAFV600E突变基因,其结果与二代测序结果一致。表明BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型建立。利用该近红外光谱DA模型预测经二代测序明确BRAF基因突变状态的42例结直肠癌组织石蜡包埋切片,检测到7例阳性（+）,35例阴性（-）,预测集正判率为83.3%。免疫组化检测BRAFV600E突变基因蛋白在结直肠癌组织中的表达,结果表明,BRAFV600E突变基因蛋白表达着色部位主要位于肿瘤细胞胞质,13例弱阳性（+）,1例中阳性（++）,28例阴性（-）,与经二代测序检测结果比较,正判率为66.7%。通过近红外光谱预测的42例BRAF野生型结直肠癌组织中,近红外光谱识别到其中7例为BRAF突变型,同时采用免疫组化BRAFV600E（VE1）抗体检测到14例为BRAF突变型,检测结果与二代测序结果比较,近红外光谱的正判率（35/42,83.3%）,免疫组化（28/42,66.7%）,两者之间正判率比较P值>0.05,无统计学差异。结论本研究建立了BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型,并利用该模型对组织标本BRAFV600E突变基因进行预测,预测结果与二代测序检测结果一致性较高,与免疫组化无明显差异。但本实验样本量较小,可变因素较多,是一种方法论的初步探讨,近红外光谱技术识别BRAFV600E突变基因能否作为一种新的检测方法应用于临床,还需要进一步扩大样本量深入研究。
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