蛋白A(StaphylococcalproteinA,SpA)色谱已成为抗体药物制备的重大关键技术之一,深入认知SpA配基与抗体分子间相互作用是开发高效SpA色谱技术的重要前提。本文以SpA分子中参与抗体结合的突变抗体结合域Z为研究出发点,分别构建了结合域Z单体及四串体重组蛋白SpA4Z。上述分子偶联于Sepharose CL-6B 基质制得亲和介质 Z-Sepharose 及 SpA4Z-Sepharose。抗体吸附平衡表明,抗体与上述两种色谱介质均具有较高的结合常数且SpA4Z亲和性高于单一 Z结合域。在此基础上,本文利用等温滴定微量热仪(Isothermal titration calorimeter,ITC)研究了抗体在 Z-Sepharose 和 SpA4Z-Sepharose 色谱介质上结合过程的量热学变化并对游离的结合域Z单体和SpA4Z与抗体结合进行了比较,解析了焓变(△H)与熵变(AS)对抗体结合的贡献。结果显示,固定化配基导致结合常数降低。配基与抗体结合过程是由△H驱动的。氢氧化钠是最常用的色谱在位清洗试剂,针对天然蛋白A对氢氧化钠碱性环境耐受性较差的问题,本文构建了突变型重组蛋白SpA4mz。本文使用微量差示扫描微量热仪(Differential scanning calorimeter,DSC)检测了 SpA4z和SpA4mz的稳定性,结合色谱实验表明同样经NaOH处理,SpA4mz比SpA4Z具有更强的稳定性。本文的研究工作有助于深化SpA配基与抗体的结合机制,为开发高效耐用的蛋白A色谱介质奠定了基础。