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向日葵胰蛋白酶抑制剂(Sunflower Trypsin Inhibitor-1,SFTI-1)是Bowman-Birk抑制剂(BBI)蛋白家族中最小、最高效的抑制剂,是由14个氨基酸残基首尾相连的天然环肽。SFTI-1除了对胰蛋白酶具有很强的抑制活性外,对凝乳酶和弹性蛋白酶也具有抑制效应。以其9个氨基酸残基构成的结合环骨架(CTKSIPPIC)为模板研发新型高效抑制剂,已成为药物研发的一个重要方向。SFTI-1的环状骨架结构及其高效的胰蛋白酶抑制活性已经引起研究人员越来越多的关注,尝试采用各种方法来合成SFTI-1环状多肽。
传统的固/液相合成方法制备环状SFTI-1,因其成本高、反应步骤繁多而使研究人员望而却步。本课题尝试采用Impact-pTwinl大肠杆菌表达系统进行环肽SFTI-1的制备。通过摸索不同表达条件,我们选定“37℃、溶氧35%、IPTG0.1mM、诱导时间4小时”为最适表达条件。由于内含肽具有自身剪切的性质,使我们利用壳多糖对获得的融合蛋白进行一步亲和纯化后就可以获得首尾闭合的SFTI-1。为了进一步纯化目的肽,我们利用SFTI-1是胰蛋白酶(Trypsin)抑制剂的特点,通过胰蛋白酶亲和层析得到了纯化的SFTI-1。使用HPLC结合质谱检测,证实其分子量与理论分子量一致。利用这一表达纯化体系,我们从每升培养物中可获得2.8mgSFTI-1。