人乳头瘤病毒是无包膜闭环双链DNA病毒,许多癌症如子宫颈癌、食管癌等的发生和发展都与HPV的感染有一定的关系。HPV目前已知有两百多种亚型,大量研究发现:高危型HPV16、HPV18在宫颈癌和食管癌病变组织中最为常见。HPV中的E6和E7是主要致癌蛋白,通过影响细胞周期、细胞凋亡等方面使宿主细胞永生化并恶性转化。已发现E6、E7蛋白在大多数肿瘤组织及癌前病变组织中持续表达,在正常组织中却不表达,因此E6、E7蛋白可被选择作为发展HPV相关肿瘤治疗性疫苗的理想靶抗原。但是E6、E7基因属于癌基因,直接用作抗原基因构建治疗性疫苗,存在较大程度的安全性隐患。已有大量研究表明,通过对癌基因E6、E7关键位点进行密码子突变,可以降低甚至消除E6、E7基因的致癌性,从而提高E6、E7蛋白作为治疗性疫苗靶抗原的安全性。树突状细胞(Dendritic cell,DC)是免疫系统中目前所知的功能最强大的抗原提呈细胞,捕捉抗原,通过MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ两种途径将抗原递交给T细胞,从而激活T细胞,诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。国内外已有大量关于DC疫苗的应用报道。本研究首先构建携带HPV18 E6E7野生型基因的重组腺病毒疫苗rAd-HPV18 E6E7-0及其DC疫苗,携带HPV18 E6E7优化融合突变基因的重组腺病毒疫苗rAd-HPV18 E6E7-3及其DC疫苗(其中对E6第138位氨基酸和E7第98位氨基酸进行突变,即C138G和C98G),然后免疫小鼠,获取T淋巴细胞,用ELISPOT技术检测各疫苗组的细胞免疫原性。结果显示基于HPV18 E6E7基因治疗性疫苗可以产生显著的细胞免疫效果,从而为进一步开发HPV18相关肿瘤治疗性疫苗打下基础。最后本研究构建了重组慢病毒载体质粒LentiCRISPR-v2-HPV16/18 E6E7,期望通过CRISPR/Cas9系统敲除HPV 16/18 E6E7基因,探索一种靶向治疗HPV相关肿瘤的新型方法。