研究目的：　　构建特异性 siRNA质粒载体转染 SCLC细胞抑制 NSE基因的表达，通过Western blot检测NSE的抑制效果，利用克隆形成实验观察NSE沉默后SCLC细胞株的存活状况，通过流式细胞术和CCK-8法检测高表达NSE和NSE沉默的SCLC细胞周期和增殖能力的变化，利用Transwell系统检测高表达NSE和NSE沉默的SCLC细胞侵袭能力变化，通过Western blot检测E-cadherin，nm23，VEGF等肺癌转移指标的变化，为探讨NSE与SCLC亲脑转移的相关性与可能机制提供实验依据。　　实验方法：　　1．SCLC细胞株筛选：通过Western blot检测4种型号SCLC细胞株的NSE蛋白表达，选择其中NSE蛋白表达最高的细胞株用于后续实验。　　2. SCLC细胞NSE基因沉默：选择NSE高表达的SCLC细胞株，利用NSE特异性的siRNA表达质粒载体启动RNAi机制，抑制该细胞株NSE基因表达，筛选出最佳干扰效率的序列。　　3．检测NSE基因抑制效果及肺癌相关转移基因的表达变化：抑制NSE表达后，利用Western blot检测SCLC细胞株NSE蛋白表达量变化观察抑制效果，标定其中干扰最强的序列用于后续实验，同时检测肺癌转移指标E-cadherin，nm23，VEGF表达的变化。　　4．检测高表达NSE和NSE沉默后的SCLC细胞的存活﹑增殖与侵袭的状况：①利用克隆形成实验观察高表达 NSE的 SCLC细胞株同内源性敲低 NSE的SCLC细胞株存活情况。②CCK-8法和流式细胞术检测高表达NSE的SCLC细胞和NSE沉默的SCLC细胞周期和生长增殖能力的变化。③利用Transwell小室检测高表达NSE和NSE沉默的SCLC细胞侵袭能力的变化。　　5．数据分析和统计学结论：本实验的数据结果均值用x+s表示，两组比较用t检验，组间比较采用单因素方差分析，＊p<0.05和＊＊p<0.01认为差异有统计学意义。实验数据的统计学分析，采用SPSS16.0软件分析和处理，以及Graphpad Prism5辅助分析以及制作图形。　　实验结果：　　1．细胞株的选择：在4组SCLC细胞株NSE蛋白表达检测结果中，选择NSE蛋白表达最高的NCI-H209为本次实验的细胞株。　　2．SCLC细胞NSE基因沉默：构建特异性siRNA质粒载体，转染SCLC细胞启动RNAi机制，抑制NSE基因表达。为获得持续稳定抑制NSE表达的siRNA表达质粒载体，采用上海吉玛制药技术有限公司提供的基因序列合成的NSE特异性siRNA质粒载体，分别命为：NSE-SiRNA-1,NSE-SiRNA-2,NSE-SiRNA-NC，并转染NCI-H209细胞株。　　3．Western blot检测质粒载体干扰NSE基因和肺癌转移指标结果：转染NSE-SiRNA-1和NSE-SiRNA-2与NSE-SiRNA-NC相比，其NSE蛋白表达量明显下降。表示NSE-SiRNA-1和NSE-SiRNA-2已经成功转染入NCI-H209细胞株，转染NSE-SiRNA-1或NSE-SiRNA-2能够明显抑制小细胞肺癌细胞NSE基因表达，转染NSE-SiRNA-NC的NCI-H209细胞株的NSE蛋白表达量变化不明显。本研究挑选了抑制效果最好的NSE-SiRNA-1序列用于后续实验。同时，检测肺癌转移相关指标中发现E-cadherin、nm23表达升高，而VEGF表达降低。　　4．高表达NSE和NSE沉默的NCI-H209细胞株的存活与增殖状况：①克隆形成实验结果显示：NCI-H209细胞株中转染NSE-SiRNA-1和转染NSE-SiRNA-NC，培养2周后，进行结晶紫染色观察所形成的克隆，通过观察可见，转染NSE-SiRNA-1的细胞较转染NSE-SiRNA-NC的细胞，不仅形成的细胞克隆数量显著减少，而且克隆分子大小也明显减小(＊P<0.05)。此实验结果表明，转染NSE-SiRNA-1对SCLC细胞的克隆形成能力有明显的抑制作用。②CCK-8主要是检测细胞增殖情况，结果显示：以NSE-SiRNA-NC组的细胞为对照，转染了NSE-SiRNA-1的　　NCI-H209细胞株，细胞增殖能力较转染NSE-SiRNA-NC的细胞增殖能力明显抑制。③流式细胞术分析结果显示：转染NSE-SiRNA-NC在48h后，SCLC细胞处于G1、S、G2/M周期的细胞比例分别为(63％±3.0％)、(26%±4.0%)、(11%±4.0%)，而转染NSE-SiRNA-1组的细胞处于G1、S、G2/M周期的细胞比例分别为(67.0％±2.0％)、(15.0%±2.0%)、(18.0%±2.0%)。说明抑制NSE基因表达导致SCLC细胞周期中S期细胞百分率显著降低。　　5．Transwell小室检测结果显示：转染了NSE-SiRNA-NC的NCI-H209细胞穿膜能力较强，穿膜细胞数约为200，而转染NSE-SiRNA-1的NCI-H209细胞穿膜能力较弱，穿膜细胞数较少为(90±15)(P＜0.01)。　　结论：　　1.转染NSE-SiRNA-1能够抑制SCLC细胞NSE基因表达。肺癌转移相关指标E-cadherin、nm23表达升高，VEGF降低。　　2.转染NSE-SiRNA-1对SCLC细胞的克隆形成能力有明显抑制作用。　　3.下调NSE基因表达能够显著抑制SCLC细胞生长增殖能力。　　4.下调NSE基因表达可抑制小细胞肺癌细胞的体外侵袭潜能。