木霉生防菌的生物学特性及其原生质体融合的构建

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通过对木霉T<,21>、T<,22>、T<,23>和T<,100>生物学特性的研究,发现木霉菌对菌丝生长和产孢的条件要求较宽.从中选出性状优良的T<,21>,其生长速度快,产孢量大,各方面生物学特性均优于其它三株,为此选其为融合亲本之一.同时对四株供试木霉菌株进行了与番茄灰霉病原菌B<,529>的拮抗试验,发现T<,22>的拮抗作用最好,于是选其为另一融合亲本.根据对菌丝菌龄、酶液配比、缓冲液—稳定剂系统、酶解时间等条件对原生质体制备和再生的影响的研究,确定了木霉原生质体制备的最适条件:以纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5.0:2.5:2.5(mg/ml)的酶液配比,0.2mol/L PBS,pH 5.8和0.6mol/L蔗糖组成的缓冲液稳定剂系统,将培养了20h的菌丝体在30℃下,酶解3h,最后获得原生质体数量约为2.7×10<7>个/ml.利用原生质体融合技术,获得了一株对番茄灰霉病原菌有较高防效的生防菌株.其抑制作用较亲本T<,22>略有提高.具体拮抗机制尚不清楚,需要进一步的研究.
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