溶磷菌YM3-2S溶磷特性及溶磷基因的克隆

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磷是生物生长所必需的营养元素,施用磷素一直是保证农业生产增产的重要手段之一,但磷素的大量应用也产生了许多环境问题。溶磷微生物可将土壤中难溶性的磷酸盐转化为可溶性盐供作物生长利用,能提高磷肥的利用率,减少土壤对磷酸盐的吸附固定,避免磷肥过量使用造成环境污染。因此从土壤中筛选高效溶磷微生物生产生物肥料,以减少磷肥施用量,对农业可持续发展,具有重要的生态和社会意义。本实验以四川省7个市县所采集的土壤为材料,从中分离出具有溶磷能力的细菌,并对其进了鉴定,对其生长特性和溶磷特性进行研究,其结果如下:1.从土壤样品中分离纯化出一株高效无机溶磷细菌YM3-2S,对它的生理生化性状及其16S rDNA进行序列分析后,将其鉴定为洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia。2.对该菌株的生长特性和溶磷特性研究表明,YM3-2S代时短,其代时为25min,生长迅速,产酸能力强,对磷矿粉的最大解磷量达40.96 mg/L,其溶磷量随发酵液pH值降低而增加,其溶磷能力与其产酸能力密切相关。3.抑菌实验的结果表明,菌株YM3-2S对玉米大斑病,玉米小斑病,玉米弯孢病,禾谷廉刀病等十几种病原真菌具有抑制作用。4.通过纸层析对YM3-2S的发酵产物进行分析,推测其可能只含有一种有机酸成分,有机酸的成分有待进一步研究。5.盆栽实验中不同的处理测定了雅安石灰性紫色土和遂宁石灰性紫色土中速效磷下降顺序为CK>CK+NK>CK+磷矿粉+NK>CK+YM3-2S+NK>CK+NK+YM3-2S+磷矿粉+食用菌发酵料。表明YM3-2S能够溶解土壤中难溶性磷,从而增加土壤中磷的有效性,改善了土壤供磷情况,促进了土壤中无效磷的溶解。6.对溶无机磷基因gabY基因克隆后,得到了一个阳性克隆pD6034,核苷酸序列测定表明,D6034与U10242具有97.49%的一致性。核苷酸序列推导的D6034的编码产物具有28个氨基酸的信号肽,说明该基因编码产物能直接分泌到胞外。通过SDS-PAGE分析D6034的表达产物,得到一条约14kD的蛋白条带。
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