【目的】通过采用现代分析技术及药效对比,对化橘红的主要有效部位——挥发油、总黄酮、总多糖等进行组合规律研究,综合分析,阐述化橘红镇痛抗炎、化痰和抗氧化作用的科学内涵,为揭示其药效物质基础,探明主要有效部位或成分的协同作用提供实验依据。【方法】采用水蒸汽蒸馏法提取化橘红的挥发油、采用溶剂法提取分离总黄酮、多糖类等成分;采用分光光度法测定总黄酮含量、总多糖含量,RP—HPLC法测定柚皮苷含量,并用HPLC指纹图谱法对总黄酮进行质量监控;采用用小鼠氨水引咳法、小鼠气管酚红法、小鼠扭体法、热板法及小鼠耳肿胀法等进行药效研究,寻找与化橘红功效相关的有效部位或成分及其组合;采用均匀设计方法,优化化橘红有效部位或成分的组合,寻找其组合规律。【结果】1化橘红有效部位的研究对化橘红化学成分中的挥发油、总黄酮、总多糖及其他成分(如脂肪酸、香豆素等),进行提取分离。对总黄酮、总多糖部位进行的含量测定。总黄酮中以柚皮苷计,不得少于80.0%;总多糖用苯酚-硫酸法测定,以葡萄糖计,不得少于75.0%,确定为主要有效部位。2化橘红有效部位及组合的化痰、镇咳的药效研究化橘红各有效部位的化痰、镇咳药效研究表明,与空白组相比较,各有效部位组药效均较优,其差异均有统计学意义,呈现一定的量效关系。在化痰方面,以挥发油高剂量组效果较为显著;在镇咳方面,以挥发油高剂量组效果较为显著。利用均匀设计将各有效部位进行组合药效研究,结果表明:在化痰方面,通过方程理论选出较佳组合为挥发油高剂量组,与单因素考察结果相符合。由统计过程分析,挥发油与总黄酮、总多糖配伍可起到增效作用。与传统水煎液相比,挥发油组药效较优,其差异有显著性意义。从数据分析选出较佳组合11(组合11为各有效部位的高剂量组,各部位之间比例为挥发油:总黄酮:总多糖:其它成分=0.8:40:80:20),与传统水煎液比,组合11效果较优,差异有显著性意义;与挥发油高剂量组比较,组合11没有显著性差异。在镇咳方面,以挥发油与总黄酮起主要作用,根据数据优选出组合11,与传统水煎液比,组合11药效值与水煎液接近,差异没有显著性意义。3化橘红有效部位及组合的镇痛抗炎的药效研究通过热板法、扭体法测定化橘红各有效部位的镇痛作用,结果表明,与空白组比较,各实验组均有一定的镇痛的作用,以总黄酮高剂量组较为显著。利用均匀设计对各有效部位进行组合研究,优选的较佳组合为组合11。热板法中,与传统水煎液相比,总黄酮高剂量组在给药后30分钟药效较好,差异有统计学意义;其它时间段差异没有显著性意义;从组合中优选出的组合11,与传统水煎液比较,组合没有显著性差异。扭体法中,与传统水煎液比较,总黄酮高剂量组及组合11药效值接近,差异没有显著性意义。通过二甲苯致小鼠耳肿胀法、蛋清致小鼠足趾肿胀法测定化橘红各有效部位的抗炎作用,结果表明,与空白组比较,各有效部位药效较优,差异有显著性意义,以总黄酮高剂量组效果较为显著。利用均匀设计对各有效部位进行组合研究,初步优选的较佳组合为组合4、6;与传统水煎液相比,各组药效相当,差异均无统计学意义。验证组合11在致炎后30分钟时药效较为显著,与传统水煎液相比,差异有统计学意义。其它时间段差异无显著性意义。4化橘红有效部位及组合的体外抗氧化的药效研究通过邻苯三酚法和邻二氮菲法体外比较化橘红各有效部位的抗氧化作用,通过抑制率比较表明,各试样均有一定的抗氧化性。邻苯三酚法中单因素考察以总黄酮高剂量组效果显著。邻二氮菲法中单因素考察以其它成分高剂量组效果显著。利用均匀设计对各有效部位进行组合研究,邻苯三酚法中,优选出总黄酮高剂量组,从对邻苯三酚自氧化抑制率来分析,组合中以实验组11效果显著,均高于传统水煎液组;邻二氮菲法中,优选出总黄酮高剂量组,从对羟自由基清除ΔA来分析,组合中以实验组4(组合4各有部部位之间比例为挥发油:总黄酮:总多糖:其它成分=0.2:40:80:10)效果显著,但以传统水煎液的抗氧化作用最为突出。5传统水煎液药效学的研究中药主要是以水煎液的形式应用于临床,起到防病治病的目的。本课题通过传统水煎液与空白对照组比较表明,有一定的化痰平喘及镇咳作用;有一定的镇痛抗炎作用:有较强的抗氧化作用。【结论】1.化橘红有效部位的研究通过制订含量限度标准来控制所用有效部位的质量,可保证药效考察时药物质量与药效的均一性。2.化橘红有效部位及组合的化痰、镇咳的药效研究在镇咳化痰方面,化橘红各有效部位考察中均以挥发油高剂量组效果较为显著。组合中以组合11较为显著,化痰药效中,与传统水煎液比较,组合11及挥发油高剂量组药效较好,差异均有显著性意义;镇咳实验中,与传统水煎液比较,药效接近,差异没有统计学意义。3.化橘红有效部位及组合的镇痛抗炎的药效研究在镇痛抗炎方面,化橘红各有效部位均有一定的药效作用。以总黄酮高剂量组效果较为显著。各有效部位组合研究表明,在镇痛实验中,组合11效果较为显著,与传统水煎液比较,组合11药效接近,差异没有显著性意义;在抗炎实验中,优选组合为总黄酮高剂量组、总多糖高剂量组,与传统水煎液比较,药效接近,差异没有显著性意义。组合11在致炎后30分钟药效较为显著,与传统水煎液相比,差异有统计学意义。其它时间段差异无显著性意义。4.化橘红有效部位及组合的体外抗氧化的药效研究通过邻苯三酚法和邻二氮菲法两种方法体外比较化橘红各有效部位的抗氧化作用结果表明,各试样均有一定的抗氧化性。邻苯三酚法中以总黄酮高剂量组效果显著;邻二氮菲法中以其它成分高剂量组效果显著。组合结果表明,邻苯三酚法中,优选出总黄酮高剂量组,从对邻苯三酚自氧化的抑制率来分析,组合中以实验组11效果显著,均高于传统水煎液组;邻二氮菲法中,优选出总黄酮高剂量组,从对羟自由其清除ΔA分析,组合中以实验组4效果显著,但以传统水煎液的抗氧化作用最为突出。5.传统水煎液药效学的研究传统水煎液有一定的合理性,但由于其中挥发油含量损失比较多,对化痰的疗效不如其它一些实验组;有一定的镇咳、镇痛抗炎作用;但在抗氧化作用方面效果相对比较显著。