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虾青素(astaxanthin,3,3-二羟基-4,4-二酮-β,β胡萝卜素)属于叶黄素类β-胡萝卜素。研究发现虾青素对人类健康很有益处,对许多疾病都有很好的治疗保护作用。它主要的药理作用包括:抗氧化、抗肿瘤、抗炎、对心血管保护作用及神经保护作用等。
前期研究表明,虾青素的抗溃疡作用与氧化应激密切相关,但未在分子水平进行深入研究。因此,本课题以胃癌细胞为研究对象,采用Western blot法检测虾青素刺激后氧化还原信号通路关键蛋白的激活情况,通过DCFH-DA法检测细胞内ROS的改变,分析他们之间的相关性。结果显示,ERK5的激活与细胞内ROS的量之间有一定的相关性,通过PEI法建立ERK5过表达细胞,采用MTT法检测ERK5对细胞增殖的影响。结果表明,ERK5能够促进细胞增殖。
采用MTT法观察细胞损伤模型的建立和虾青素的保护作用。通过显微镜下观察细胞形态,Hoechst33342染色观察细胞核的情况,Annexin V/PI双染并经流式细胞仪检测相结合的方法,研究证实AST可以有效减少H2O2诱导的细胞凋亡。最后,检测了细胞内ROS含量的变化,以及ERK5激活情况。结果表明,ERK5与虾青素抗氧化作用具有相关性。
另一方面,与大多数β胡萝卜素一样,虾青素的生物利用度与结构有很大的关系,而水溶性差、性质不稳定都使它的应用受到限制。通过乳化-溶剂蒸发法制备虾青素纳米混悬剂。通过单因素分析优化了制备工艺,得到平均粒径7.8nm,水中分散性良好的虾青素纳米混悬剂。建立了虾青素的HPLC分析方法对虾青素含量进行定量分析。采用透射电镜拍摄了虾青素纳米分散体的形态,初步考察了制剂于4℃放置3个月的稳定性、细胞摄取和对MGC-803细胞中ERK5的激活情况。结果表明制备的虾青素纳米混悬剂有效提高了虾青素在水中的溶解度及化学稳定性。