此文对本实验室分离鉴定的DPV UL30基因(GenBank登录号EF643560)开展了以下系列研究:DPV UL30基因序列生物信息学分析、克隆、原核表达和抗体制备、表达产物在病毒感染宿主鸭胚成纤维细胞中细胞定位检测和表达时相分析。所得实验结果如下:1.鸭瘟病毒UL30基因序列的生物信息学分析DPV UL30基因大小为3621bp,编码1206aa。NCBI Conserved Domains查找工具分析发现该蛋白序列含有四个主要保守区域,分别是B系DNA聚合酶的核酸外切酶区域(DNA_pol_B_exo)、B系DNA聚合酶区域(DNA_pol_b)、DnaQ样核酸外切酶家族的保守的3’—5’端外切酶保守区域(DnaQ_like_exo_superfamlily)和B系DNA聚合酶的催化区域(POLBc_superfamlily)。与α疱疹病毒的氨基酸同源性较之与β、γ疱疹病毒要高。2.UL30基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备通过构建pET-32-UL30重组原核表达载体,利用IPTG进行诱导表达,得到大小约为152.7kD的重组融合蛋白,与预期表达的蛋白大小相一致。主要以包涵体的形式存在。最佳表达优化条件为0.4 mmol/L的IPTG,23℃下诱导7h。利用纯化的重组蛋白制备兔抗高免血清。兔抗UL30 IgG经辛酸-硫酸铵盐析和High-Q阴离子交换层析纯化具高效、特异性强的优点。3.DPV UL30基因表达产物在宿主细胞中细胞定位和表达时相分析通过细胞免疫荧光进行病毒感染DEF的细胞定位检测,结果表明在接种病毒2小时后的鸭胚成纤维细胞中已经可以发现有绿色的点状荧光。4h、6h后逐渐增加,12h后绿色点状荧光达可以很明显的观察到,并且在细胞核周围也有一定的分布。接种DPV24小时后的检测到的荧光数量达到最多,仍然是大部分的荧光分布在细胞质中,少量的分布在细胞核周围。48h观察到的荧光开始逐渐减少分布也逐渐开始向细胞核靠拢,在60h、72h后荧光主要集中在细胞核周围,原因可能是由于随着细胞的凋亡,细胞萎缩使得胞质间隙变小,荧光随即大量出现于细胞核周围。