慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)是一种严重危害人类健康的传染性疾病,全球约20亿人曾感染过乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV),其中部分慢性感染者发展为肝衰竭、肝硬化、原发性肝癌。据报道,HBV易通过淋巴转运藏匿于肝门淋巴结形成肝外病毒储库,常规剂型难以包裹抗病毒药物到达肝门淋巴结导致CHB难以治愈。纳米乳(Nanoemulsion,NE)是一种新型淋巴靶向递药系统,它是由表面活性剂、助表面活性剂、水相和油相按照适合的配比自发形成的粒径范围界定在1~200 nm之间的透明稳定体系。纳米乳处方中亲脂性成分比例大,不仅与淋巴系统具有较强的亲和性,而且体系粒径较小、比表面积较大,经淋巴转运时障碍较小,可被用作载体靶向淋巴系统。黄芩苷(baicalin,BA)是从唇形科植物黄芩的干燥根中得到的黄酮类有效成分,临床上用于治疗CHB,疗效确切。现代药理研究表明黄芩苷具有抑制HBV复制、清除HBV复制模板环状DNA、抑制肝纤维化等作用。课题组前期将难溶性成分制成油基纳米乳,发现纳米乳体系可促进难溶性药物的肠淋巴结摄取,约有25%的药物经淋巴系统转运,淋巴靶向效率由原来的7%提高到51%。本课题在以往研究工作基础上,制备稳定的W/O型黄芩苷纳米乳,考察纳米乳大鼠体内的药动学参数及淋巴靶向效率,以期增加大鼠肝门淋巴结内的药物浓度,为CHB防治提供更有效的药物治疗对策。目的:制备稳定的W/O型黄芩苷纳米乳递药体系,增加黄芩苷经淋巴途径的吸收,使药物富集于肝门淋巴结,为构建一种高效低毒的淋巴靶向递药系统提供理论依据和实验基础。方法:1.黄芩苷纳米乳的制备及质量评价选用安全无毒、生物相容性较好的司盘60、司盘80、大豆磷脂为表面活性剂,PEG 400、丙二醇、无水乙醇为助表面活性剂,肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、棕榈酸异丙酯(IPP)、辛酸/癸酸甘油酯(GTCC)为油相,通过处方筛选和伪三元相图的绘制,以W/O型纳米乳区域面积为指标,筛选空白纳米乳的处方;制备稳定的黄芩苷纳米乳并对其进行质量评价,包括鉴别实验、形态学观察、粒径分布、初步稳定性考察。2.黄芩苷纳米乳大鼠体内药动学研究分别灌胃给予大鼠黄芩苷纳米乳及水性混悬剂,通过药动学实验考察大鼠体内黄芩苷血药浓度经时变化情况,采用HPLC法测定血浆药物浓度,并进行方法学考察。DASS 2.0软件拟合各组大鼠药动学参数,比较黄芩苷纳米乳及水性混悬剂的药动学参数。3.黄芩苷纳米乳淋巴靶向性研究分别灌胃给予大鼠黄芩苷纳米乳、油性混悬剂及水性混悬剂,通过乳糜微粒阻断实验考察大鼠体内黄芩苷经淋巴转运情况,采用HPLC法测定血液中药物含量,用DASS 2.0软件拟合药动学参数,计算淋巴靶向效率;分别灌胃给予大鼠黄芩苷纳米乳及水性混悬剂,手术摘取大鼠肝门淋巴结,采用HPLC法测定肝门淋巴结内的药物含量。结果:1.黄芩苷纳米乳的制备及质量评价经过处方筛选和伪三元相图的绘制,得到最佳黄芩苷纳米乳处方为:大豆磷脂(PC):22.7%,丙二醇:22.7%,肉豆蔻异丙酯(IPM):45.5%,水:9.1%,黄芩苷载药量:8.5 mg/m L;鉴别实验结果表明黄芩苷纳米乳为W/O型;形态学实验观察到黄芩苷纳米乳为球状、分布均匀,大小均一;激光粒度分析仪测定其粒径为66.95±17.32 nm,多分散指数(PDI)为0.134;初步稳定性实验结果显示黄芩苷纳米乳在4°C、25°C下90天均保持稳定,外观澄清透明,无分层现象,且4°C相对25°C粒径变化更小。2.黄芩苷纳米乳大鼠体内药动学研究药动学实验结果显示黄芩苷纳米乳、水性混悬剂的AUC0-t分别是61.984±4.645 mg/L*h和5.881±0.264 mg/L*h,Cmax分别是3.01±0.199 mg/L和0.965±0.100 mg/L,Tmax分别是10 h和2.5 h,MRT0-t分别是18.895±0.647 h和10.497±0.379 h,VRT0-t分别是5.796±0.444 L/kg和53.794±19.648 L/kg,CLz/F分别是0.31±0.023 L/h/kg和1.786±0.927 L/h/kg。结果表明相对于水性混悬剂,纳米乳不仅显著提高大鼠体内黄芩苷血药浓度,还延长了黄芩苷作用时间。3.黄芩苷纳米乳淋巴靶向性研究大鼠经淋巴转运实验结果显示黄芩苷纳米乳组的大鼠淋巴阻断组和淋巴未阻断组的Cmax分别为3.010±0.119 mg/L和1.567±0.220 mg/L,AUC0-t分别为23.076±1.244 mg/L*h和9.236±0.940 mg/L*h;水性混悬剂组大鼠淋巴阻断组和淋巴未阻断组的Cmax分别为0.965±0.079 mg/L和0.885±0.072 mg/L,AUC0-t分别为3.616±0.434 mg/L*h和3.29±0.131 mg/L*h,油性混悬剂组大鼠淋巴阻断组和淋巴未阻断组的Cmax分别为0.819±0.100 mg/L和0.578±0.069 mg/L,AUC0-t分别为5.648±0.6170mg/L*h和4.345±0.369 mg/L*h。由各组的AUC0-t分别计算得出黄芩苷纳米乳、油性混悬剂、水性混悬剂经淋巴转运比例分别为59.98%、23.07%、9.02%。结果表明纳米乳相对油性混悬剂、水性混悬剂能够显著提高药物经大鼠体内淋巴途径转运的含量。大鼠肝门淋巴结含量测定结果显示黄芩苷纳米乳和水性混悬剂在0.5 h肝门淋巴结均未检测到黄芩苷,黄芩苷水性混悬剂仅在2~4 h肝门淋巴结内含有微量黄芩苷,黄芩苷纳米乳组在1~12 h肝门淋巴结内药物含量均显著高于黄芩苷水性混悬剂组。表明相较于水性混悬剂,纳米乳能够富集于肝门淋巴结。结论:本研究成功制备了稳定的W/O型黄芩苷纳米乳;与水性混悬剂相比,黄芩苷纳米乳不仅提高了药物经淋巴途径转运量,而且可以富集于肝门淋巴结,具有较好的淋巴靶向性。