树突状细胞(Dendritic cell，DC)是体内极其高效的专职抗原提呈细胞(APC)，而且其激活幼稚T细胞(nave T cell)、启动初次免疫应答(可能是免疫排斥也可能是免疫耐受)的能力也是单核细胞以及属于非专职APC的B细胞等所不具备的。按照DC启动Th1和Th2免疫应答趋向的不同可以将其分为DC1和DC2两个亚群。由于Th1和Th2与移植免疫密切相关，所以研究可能在此之前的更早的免疫反应决定步骤——DC1和DC2，在移植免疫学中就显得尤为重要。多种细胞因子可以通过不同的机理调节DC1/DC2亚群，改变机体免疫应答方式，从而有可能借此诱导移植免疫耐受，GM-CSF和G-CSF就是其中的两种。 目的：建立小鼠异位心脏移植排斥反应模型及简单经济的小鼠外周血DC亚群分离、检测方法。以异位心脏移植小鼠为模型，研究GM-CSF和G-CSF对小鼠外周血DC亚群的不同调节作用，进而探讨DC1/DC2亚群的调变对移植排斥及移植免疫耐受的影响及机理，以期建立新的移植免疫耐受诱导方法。一 方法：建立和对比小鼠腹腔异位心脏移植和颈部异位心脏移植动物模型。利用密度梯度离心和补体依赖的细胞毒性单克隆抗体杀伤混杂细胞的方法去除外周血中DC以外的免疫活性细胞住要包括：粒细胞、T细胞、B细胞、单核巨噬细胞、NK细胞X 建立小鼠外周血DC的分离方法；以CDI Ic－FITC和 CD8a－PE双色流式细胞技术检测小鼠 DCI和 DCZ亚群比值①C ／DCZX进而用建立的检测方法对 G（SF诱导 DC亚群改变的量效关系进行了探索，检测了rhG－CSF和rhGM－CSF处理受体后，其外周血DCI和DCZ亚群绝对数量以及DCltoCZ的变化；继续给予实验动物同种异体PBMC刺激后，用ELISA法检测CD4“T细胞的IFN－Y和几－4细胞因子分泌情况的改变，用体外单向混合淋巴细胞反应饲＊R）检测移植免疫排斥反应的变化：最后，以小鼠腹腔异位心脏移植为动物模型，观察体内移植兔疫应答的变化。 结果： ①移植免疫动物模型：成功建立了小鼠腹腔和颈部异位心脏移植动物模型，在现有条件下，前者成功率高，后者速度快。 ②DC 的分离：成功建立了外周血DC分离方法，分离得到的细胞中DC的比例最高可以达到 83．lo士 4．lO。 ＠DC和DCZ亚群数量和比值的变化：体内给予rhGM－CSF处理使外周血 DCI 绝对数明显增加［OS．3上9．3）XI炉几 VS．（116．8士25．6）X10‘＆，P＜0＊］，而DCZ绝对值略有减少，但无统计学差异［＊．3土2．9）X 106几VS．门．8士4．4）X106／L，P＞0＊习，DCltoCZ明显升高＊．9士7．6VS．3．9土1．2，P＜0．of）。相反，体内给予rhG－CSF处理后DCI数量无明显变化［（3．0f10．2）X 10吭VS．（3．5上9刀）X106／L，P＞0刀习，DCZ绝对数量变化显著［（ 石士2．6）X10吭 VS． 第6 页一OS．4I9．9） X 10叽，P＜0．of］，DCltoCZ降低为原来的约1／5倍（．3if．SVS．0．8士0．3，尸＜0刀1）。 ④ThlM 细胞因子的改变：hGM－CSF 处理过的实验动物在接受C57BL／6的PBMC致敏后，CD4”T细胞的IM－Y分泌量明显增加［O03士164）pg／mL vs．（213土855） p咖L，P＜0＊1］，IL－4则无明显变化。rhG－CSF处理过的BALB／C小鼠再给与C57BL／6的PBMC致敏，结果CD4”T细胞分泌的Th／ThZ型细胞因于的量刚好与前者相反，代表 Th型细胞因子的 IF’N－Y无明显变化［（20 士 96） p旮mL vs．（229士 111）pg／mL，尸＞0＊5］，代表 ThZ 型细胞因子的几4却明显增加ro．0土 12．l）pg／mL vs．侣7．7土39．8）pg／mL，P＜0．of卜 ⑤DC刺激T细胞增殖能力的变化：无论是rhG．CSF还是rhGM．CSF处理过的小鼠DC均有很强的刺激T细胞增殖的能力，在T细胞与DC比例为1001时即有显著的刺激作用，而效靶比为 5＊时则刺激作用更明显。细胞因子的刺激不能显著改变DC刺激T细胞增殖的能力。 ③体外移植兔疫应答（MLR）：rhGM＊SF的处理使被 C57BL／6 PBMC致敏的BALB儿 ’J’鼠T细胞对此异体抗原的增殖指数口）显著增强＊．27土1．84VS．5．33士1＊5，P＜0＊1）；相反，hG，CSF的处理则使C57BL／6 PBMC致敏的BALB儿，J’鼠T细胞对此异体抗原的 SI显著减低，＊．39f0．37 VS．5＊土0．95，P功刀1）两种处理均使受体 T细胞对无关第三者 C3H小鼠 PBMC抗原刺激的增殖反应保持相对正常 ①小鼠心脏移植模型：rhGM＊SF处理过的BALB／c小鼠做为受体使得来自 C57BL／6 ，J’鼠的同种异体心脏移植物存活时间缩短＊．7d士 1刀d VS．6．Zd上1二d，P刃刀匀，山仆“F的处理则使得心脏移植物存活时间延长＊．Zd土 第7 页一l．sd VS．17厂d土4．3d，P＜0．of）。 结论： ①本实验在一般显微外科技术和条件下，成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植和小鼠颈部异位心脏移植动物模型，并证明前者成功率高，后者速度快，获得的经验有利于小鼠心脏移植动物模型在我国的普及和推广。 ②本实验建立的外周血DC分离方法，达到了一般免疫?