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第一部分PHLDA2对结肠癌功能的影响及相关机制的研究目的:结直肠癌(colorenctal cancer,CRC)的发病率和死亡率在所有的胃肠道肿瘤中位居第一。但至今仍然缺乏新颖有效的治疗策略。血小板-白细胞C激酶底物同源性结构域蛋白家族成员2(Pleckstrin homology like domain family a member 2,PHLDA2)作为印迹基因,在乳腺癌、胰腺导管腺癌和骨肉瘤中发挥癌或抑癌基因的作用。在本研究中,我们主要讨论PHLDA2在体内和体外对结肠癌的作用及潜在机制。方法:采用qRT-PCR技术检测结肠癌组织、癌旁组织和结肠癌细胞中PHLDA2的mRNA表达水平,IHC和western blot技术检测结肠癌、癌旁组织和结肠癌细胞中PHLDA2的蛋白表达量。通过qRT-PCR验证不同敲减片段对PHLDA2表达水平的影响,选择合适的片段和慢病毒载体进行拼接,包装成慢病毒,然后转染到HCT116和SW480细胞系中。通过CCK-8和克隆形成实验,检测HCT116和SW480细胞在体外的增殖能力;Transwell侵袭和迁移实验,检测HCT116和SW480细胞在体外的侵袭和迁移能力;细胞周期和凋亡水平采用流式细胞仪检测;透射电子显微镜,检测细胞自噬水平;western blot技术,检测相关蛋白表达水平。此外,还通过异种肿瘤移植模型和KI67染色,评估PHLDA2在裸鼠体内对细胞增殖的影响。结果:PHLDA2在癌组织中表达明显增加。在体外,敲低PHLDA2,抑制HCT116和SW480细胞的增殖,侵袭,迁移能力和EMT过程。PHLDA2低表达可以通过激活自噬促进细胞凋亡。在体内,低表达的PHLDA2可以抑制裸鼠皮下肿瘤的生长。PI3K/AKT信号通路在一定程度上参与了PHLDA2对自噬和EMT的调节过程。结论:研究表明,PHLDA2在结肠癌中发挥肿瘤促进子的作用,下调PHLDA2可以抑制结肠癌细胞的增殖和PI3K蛋白的表达,PI3K表达抑制后,分别通过PI3K/AKT/mTOR和PI3K/AKT/GSK-3β通路促进自噬和抑制EMT。第二部分PHLDA2对肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响目的:探索血小板-白细胞C激酶底物同源性结构域蛋白家族成员2(Pleckstrin homology like domain family A member 2,PHLDA2)在肝癌中的表达及对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法:基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)在线数据库分析PHLDA2在肝癌和癌旁组织中的表达差异以及其表达水平对肝癌病人总体生存率的影响。筛选sh-PHLDA2慢病毒稳转株。CCK-8和克隆形成实验检测Hep3B和Huh7细胞的增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验,检测Hep3B和Huh7细胞的侵袭和迁移能力,流式细胞术检测Hep3B和Huh7细胞的凋亡水平。结果:PHLDA2在肝癌组织中高表达,高表达的PHLDA2降低肝癌病人的总体生存率;PHLDA2低表达可以抑制Hep3B和Huh7细胞的增殖、侵袭和迁移能力,增加Hep3B和Huh7细胞的凋亡率。结论:PHLDA2可促进肝癌的发生发展,具有肿瘤促进子的功能。